豬細(xì)小病毒(PPV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)的相關(guān)產(chǎn)品:PAX1 配對(duì)盒基因1抗體 規(guī)格: 0.1ml
FBXO11 F-box蛋白家族FBXO11抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-CDC27/ANAPC3(Ser427) 磷酸化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml
IL-3R alpha/CD123 白介素3受體a鏈抗體 規(guī)格: 0.2ml

操作流程:

收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽(yáng)性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測(cè)序——>測(cè)序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫(kù)——>質(zhì)粒實(shí)物保存,。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

 

 

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

產(chǎn)品特點(diǎn)：

◇高特異性：與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng)，無(wú)非特異性擴(kuò)增,；

◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝,；

◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè),；

◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒,。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,，并記錄在電腦軟件之中,，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得定量結(jié)果,。因此,，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期）,，此時(shí)微小誤差尚未放大,，因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的,。

2）Ct值與起始模板的線(xiàn)性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系,，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此,，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量的方法,。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法,。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,，重現(xiàn)性定量方法，已得到的*,，廣泛用于基因表達(dá)研究,、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域,。

定量PCR方法：

a,、競(jìng)爭(zhēng)法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）,。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,，而待測(cè)模板不被酶切,，可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi)，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù),。

b、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記,，下游引物不標(biāo)記,。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增,。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,，以?xún)?nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)

110642-44-9朝藿定C 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

胰島(Ins) 規(guī)格： 3支/套，0.5ml/支

珊瑚姜 規(guī)格： 0.5g

110042-38-1款冬 規(guī)格： 20mg

26904-64-3氧化槐果 規(guī)格： 20mg

110-15-6琥珀(丁二)-對(duì)照品;有報(bào)告 規(guī)格： 100mg

艾葉對(duì)照藥材 規(guī)格： 1g

17680-84-1高車(chē)前;Homoplantaginin 規(guī)格： 20mg

28831-65-4紫草 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

山綠茶 規(guī)格： 5g

豬細(xì)小病毒(PPV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)半乳糖苷酶釋放法細(xì)膜損傷熒光檢測(cè)試劑盒  20次

正苯基萘胺攝入法細(xì)膜損傷熒光檢測(cè)試劑盒  20次

細(xì)凍存培養(yǎng)基  100毫升

特殊細(xì)營(yíng)養(yǎng)基  100毫升

細(xì)合成基礎(chǔ)培養(yǎng)液（SBE）  100毫升

10倍細(xì)合成基礎(chǔ)培養(yǎng)液  100毫升

葡萄糖  

氨  

Casamino acid  

使用方法:

一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭,，下同）。

3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用,。

4. 換槍頭,，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品,。放冰上待用。

5. 換槍頭,，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品,。放冰上待用,。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用,。

二,、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。

8. 如果有 N 個(gè)樣品,，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管,。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。