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原鈣黏素1酶聯(lián)免疫試劑盒說明書

特點：

1,、高效,、靈敏,、特異的抗體;

2、穩(wěn)定的重復性和可靠性;

3,、吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高的固相載體;

4,、適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標本類型。

試驗原理：
ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知TFR/CD71濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將TFR/CD71和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中TFR/CD71的活性濃度呈比例關系。

樣本處理及要求：

1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心,。

2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心,。

3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。

4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。

5.組織標本：切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。
標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.

操作步驟：
1． 使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7． 每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8． 取出酶標板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值,。

結(jié)果判斷與分析：
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的ES標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的ES含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3,、檢測值范圍：0-240pg/ml

操作注意事項：
1． 試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存,。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7． 底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9． 按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。