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腫瘤血管生長因子試劑盒elisa說明書
閱讀：674 發(fā)布時間：2021-10-28| 提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 17.5KB |
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腫瘤血管生長因子試劑盒elisa說明書
特點(diǎn)：
一,、高效,、靈敏、特異的抗體;
二,、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
三,、吸附性能好，空白值低,，孔底透明度高的固相載體;
四,、適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;
試驗(yàn)盒原理：
ES試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知ES濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測,。先將ES和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中ES的濃度呈比例關(guān)系,。
操作步驟：
1． 使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時,。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6． 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
7． 每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值,。
4,、敏感度： 0.1 pg/ml,。
結(jié)果判斷與分析：
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的ES標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線,，樣品的ES含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3,、檢測值范圍：0-240pg/ml
操作注意事項(xiàng)：
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。