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腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)
閱讀：1005 發(fā)布時(shí)間：2018-11-2| 提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 117.7KB |
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腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的主要組成成分,，能夠限制可溶性物質(zhì)和細(xì)胞等從血液進(jìn)入大腦,。大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與外周內(nèi)皮細(xì)胞相比具有一些相同特性。如：1）腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存在許多細(xì)胞間緊密連接,，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗,，延遲細(xì)胞旁的通量；2）腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺乏內(nèi)皮細(xì)胞的窗孔結(jié)構(gòu),，其液相物質(zhì)胞飲水平較低,；3）腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有不對(duì)稱(chēng)定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，從而產(chǎn)生 “兩極分化”的表現(xiàn)型,。 與外周內(nèi)皮細(xì)胞相同,，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)細(xì)胞粘附分子，調(diào)控白細(xì)胞進(jìn)入大腦,。由于微血管內(nèi)皮細(xì)胞的器官特異性,，內(nèi)皮細(xì)胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HBMEC)提取于人腦組織,，提取純化之后立即凍存,。每管含有細(xì)胞數(shù) >5×105 cells/ml,，此細(xì)胞通過(guò)vWF/Factor VIII 和CD31 (P-CAM)免疫熒光染色驗(yàn)證，經(jīng)測(cè)試不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌。
腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,， 細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：
1、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)（laminarflow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作,。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染,。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面,。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作,。
2,、無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品,，例如試管架,、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,，以利于氣流之流通,。實(shí)驗(yàn)用品以70%ethanol擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域,，勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作,。
3、小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品,，避免造成污染,。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn),。容器打開(kāi)后,，以手夾住瓶蓋并握住瓶身,，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面,。
4,、工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。對(duì)于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)（至少ClassⅡ）。操作過(guò)程中,，應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生,，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等,，并避免尖銳針頭之傷害等,。
5、定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：5.1CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養(yǎng)箱之CO2濃度,、溫度,、及水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水用無(wú)菌水，每周更換）,。5.3.無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow壓力,，定期更換紫外線(xiàn)燈管及HEPA過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),，3000小時(shí)/HEPA）,。6.水槽可添加消毒劑（Zephrin1:750），定期更換水槽的水
6,、粉末培養(yǎng)基配制好后（加了血清）,，一般在4度盡量不要超過(guò)1個(gè)月，如在-20度存放時(shí)間可長(zhǎng)一些,，但也不要超過(guò)3-4個(gè)月,，可能對(duì)于永生化細(xì)胞株來(lái)說(shuō)要求不是太高，細(xì)胞嬌弱,，放置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),。
7、開(kāi)紫外線(xiàn)照射臺(tái)的時(shí)候,，就將培養(yǎng)基,、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫,。這樣40分鐘后,，溫度也升上來(lái)了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱,。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生,，有的常年不清洗,，里面很臟，容易在外面瓶身上吸附大量細(xì)菌,。因此用它的也一定要勤換水,。從水浴鍋拿出后，找個(gè)毛巾擦干上面的水,。