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菌種保藏（culture preservation,，culture collection）是保持微生物菌株活力和遺傳性狀的關(guān)鍵技術(shù),。在分子生物學(xué)研究中，經(jīng)過(guò)基因編輯或改造的菌種通常非常珍貴且微量,，因此需要進(jìn)行妥善的保藏,。以下是具體的操作步驟：

 

菌種保藏：

1. 將待保存的菌液與配好的甘油混合液按1:1比例混合，最終達(dá)到20%甘油濃度,。配置40%（v/v）甘油滅菌水混合液,。

2. 取2ml離心管或保菌管，加入500微升40%甘油-水混合液,。

3. 用移液槍吸取500微升菌液,，將槍頭深入液面以下緩緩加入。

4. 將離心管或保菌管放入-80℃冰箱保存,。

5. 在保菌管上標(biāo)明日期,、菌種、抗性等詳細(xì)信息,，以便日后識(shí)別,。

菌液復(fù)蘇：

1. 復(fù)蘇保存的菌液可以進(jìn)行后續(xù)操作。主要步驟如下：

2. 取含有抗性的LB培養(yǎng)基,，每個(gè)培養(yǎng)管裝入約八毫升,。所有操作均在無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行，以防污染,。

3. 向每管加入100微升菌液,，37℃、180rpm搖12小時(shí),。

4. 氨芐抗性配置：1g氨芐青霉素鈉溶解于10ml滅菌水中,，過(guò)濾后-20℃保存。

5. LB培養(yǎng)基配置：10g氯化鈉,、10g胰蛋白胨,、5g酵母提取物溶于一升體系中,，分裝到250ml錐形瓶，每瓶100ml,。Amp抗性：100ml培養(yǎng)基加入100微升氨芐抗性,。 

通過(guò)這些簡(jiǎn)單的步驟，你可以有效地保藏和復(fù)蘇珍貴的菌種,，為后續(xù)的分子生物學(xué)研究提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),。