化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
ELISA酶聯(lián)吸附試驗標(biāo)本引起結(jié)果問題分析
閱讀：152 發(fā)布時間：2025-1-3ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）即酶聯(lián)吸附試驗,，是一種常用的固相酶免疫測定方法。血清是常用的ELISA試劑盒試驗常用的標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種,。
1,、內(nèi)源性物質(zhì)
有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果,。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子,、補(bǔ)體、嗜異 性抗體,、嗜靶抗原自身抗體,、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體,、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
（1）類風(fēng)濕因子
人血清中IgM,、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,，從而導(dǎo)致假陽性。解決該情況的辦法是：①用F(ab)2替代完整的IgG,；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃,，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時,，可以用2-巰基yi 醇等加入到標(biāo)本 稀釋液中,，使RF降解。
（2）補(bǔ)體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,，抗體分子發(fā)生變構(gòu),，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來,，從而造成假陽性,。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃,，10 min或56℃,，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig ( s ) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動 物Ig ( s ) ,，但加入量不足或亞類不同時無效,。
（4）嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定,。
（5）醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體
臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),，均有可能使這些病人體 內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體,；另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig ( s )抗體,。這些病人ELISA測定時均可產(chǎn)生假陽性,。解決的辦法是：測定抗原時，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig ( s ) ,，從而克服由于上述原因造成的假陽性,。
（6）交叉反應(yīng)物質(zhì)
類di高辛,、類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì),。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大,，但在用單克隆抗體測定抗原時 ，假如交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時,，也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,。
（7）標(biāo)本中其它成分的影響
血清脂質(zhì)過高、膽紅素,、血紅蛋白及粘度過大等,，均對ELISA測定結(jié)果有干擾作用。
2,、外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)經(jīng)常是由于用于ELISA測定的血標(biāo)本的采集,、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血,、標(biāo)本被污染,、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集 不全和采血管中添加物等影響,。
（1）標(biāo)本溶血
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的 ELISA測定中,，會導(dǎo)致非特異性顯色,，干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用,，標(biāo)本采集時必須注重避免溶血,。
（2）標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此,，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
（3）標(biāo)本保存不當(dāng)
在冰箱中保存過久的標(biāo)本,，血清中IgG可聚合成多聚體,、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深,、甚至造成 假陽性,；標(biāo)本放置時間過長（如一天以上），有時抗原或抗體免疫活性減弱,，亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,，ELISA測定的血清 標(biāo)本宜為新鮮采集,；如不能立即測定,，5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存,；凍存后融解的標(biāo)本,，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均,，應(yīng)充分混合后再測定,，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩,。
（4）標(biāo)本凝集不全
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h全凝固,。臨床檢驗工作中,，有時為了爭取 時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清,，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,，在ELISA測定過程中可以形成 肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果,；這類情況于次日復(fù)查時因血凝已全,，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?,。為避免上述干擾作用,，解決的辦法最好是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血 管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>
（5）標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑（如肝素,，EDTA）,、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
綜上所述,，對臨床檢驗ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果,，在考慮試劑因素和操作因素之外，更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分 析,，并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用,，從而為臨床提供正確可靠的檢測結(jié)果。