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ELISA試驗(yàn)假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果解析
閱讀：591 發(fā)布時(shí)間：2024-11-13ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是目前臨床上常用的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法，由于其試劑穩(wěn)定,，易保存,，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀,，既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn),，又可用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析,，目前已廣泛用于微生物學(xué),、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子檢測等領(lǐng)域,。
ELISA有敏感性高,，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的特點(diǎn),，但其同時(shí)存在影響因素多的不足,，現(xiàn)就實(shí)驗(yàn)操作中常見的影響因素進(jìn)行分析實(shí)驗(yàn)，以提高的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,。
ELISA試驗(yàn)假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果解析
1,、標(biāo)本的采集與保存
ELISA試劑盒當(dāng)標(biāo)本采集保存不當(dāng)產(chǎn)生溶血時(shí),，紅細(xì)胞中的血紅蛋白釋放到血清中，血紅蛋白具有過氧化物酶的性質(zhì),，其通過吸附或“PP效應(yīng)"（蛋白質(zhì)間相互吸附的現(xiàn)象）結(jié)合后,，可催化A、B液顯色而造成假陽性
標(biāo)本采集保存不當(dāng)致細(xì)菌污染,，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,，會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)；標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長導(dǎo)致血清IgG聚合,，易使間接法的試驗(yàn)本底加深,。因此，標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測,。
反復(fù)凍融血清會(huì)使抗體效價(jià)跌落,，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存做多次檢測，宜少量分裝凍存,。
2,、加樣
ELISA試劑盒如果 樣品稀釋液少加或血清多加，都會(huì)引起本底增高,。對于間接法來說,，受上述兩個(gè)因素影響更大。因?yàn)檠逯惺軝z的特異性IgG只有IgG中的一小部分,。IgG的吸附性很強(qiáng),，非特異性IgG可直接吸附到固相載體上，有時(shí)也可吸附到包被抗原的表面,。這些非特異性的IgG均可以和酶標(biāo)二抗發(fā)生反應(yīng)而造成較高陰性本底或假陽性,。如果加入的血清過多，高于規(guī)定的稀釋倍數(shù),，極易造成高值陰性,。反之，造成假陰性,。
如果加入的酶結(jié)合物過多或加在較高的孔壁上或孔口,，也會(huì)引起本底升高或假陽性。
如果血液未開始凝固或凝固不全時(shí)就強(qiáng)行離心分離血清,，此時(shí)的血清中仍留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,，易造成假陽性結(jié)果,。
3. 溫育
由于ELISA試劑盒試驗(yàn)在一定溫度下的反應(yīng)時(shí)間并不是反應(yīng)的終點(diǎn)，溫育時(shí)間過短,、溫度過低,，易致顯色不全,；溫育時(shí)間過長、溫度過高,，易致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,，難以清洗徹di，產(chǎn)生陰性高值或假陽性反應(yīng),。因此,，要嚴(yán)格按規(guī)定的溫度和溫育時(shí)間進(jìn)行。
由于水浴較難將溫度控制在穩(wěn)定的范圍,，因此我們每次試驗(yàn)時(shí)應(yīng)認(rèn)真觀察水浴箱的溫度,，盡量少開啟水浴箱門，嚴(yán)格控制水浴的溫度為37±0.5,。同時(shí),，微孔板不可重疊放置，以保證傳熱均勻,，各板的溫度都能迅速達(dá)到平衡,。
由于試劑盒通常設(shè)定的反應(yīng)溫度為37度，在這個(gè)溫度下溫育一定時(shí)間,，蒸發(fā)的水分會(huì)很多,，對于整個(gè)反應(yīng)體系來講，各種反應(yīng)物的濃度會(huì)不斷地增加,，這樣必會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)zui后的值升高,。因此溫育時(shí)應(yīng)貼上封板膠。