日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

       ELISA又稱酶聯(lián)免疫吸附測定,，是定量檢測體液中各種靶標蛋白含量的常用方法,。其呈色反應可進行定性或定量分析，利用HRP酶催化TMB,，反應產(chǎn)生藍色亞胺溶液,，加入終止液后，使藍色陽離子轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,。除了常見的藍色和黃色,，ELISA實驗過程中,，也會出現(xiàn)一些不同尋常的多樣色彩。

一,、墨綠色 / 深藍色

例：加入底物溶液孵育后，酶標板孔溶液變成墨綠色或深藍色,。

在正常的ELISA實驗中,，加入底物溶液孵育后，標曲前四孔出現(xiàn)明顯藍色梯度,，即可終止反應,。但是，當孵育的HRP酶結(jié)合物工作液濃度過高,，或樣本濃度遠高于檢測范圍時,，標曲最高1-2個梯度孔或樣本孔可能會呈現(xiàn)墨綠色或深藍色。

墨綠色樣本終止反應后,，在450nm波長下讀取的OD值可能會比實際要低,；深藍色標曲會由于梯度OD值過于接近，無法擬合得到有效標曲并準確計算樣本濃度,。

建議：

（1）嚴格控制每一步的孵育溫度和時間,，按照說明書要求制備HRP酶結(jié)合物工作液；

（2）在顯色階段,，通過前四孔出現(xiàn)明顯藍色梯度來控制顯色時間,；

（3）濃度過高的樣本需要稀釋到試劑盒檢測范圍內(nèi)，再進行測定,。

二,、黃色

例：終止反應后，整板變成黃色,。

可能原因：

1 競爭法按照夾心法操作：兩者原理不同,，操作步驟不同，請注意區(qū)分,。

2 洗滌不當：甩板時離廢液桶太近,，導致液體反濺；甩板不干脆,，導致液體殘留或流入其他孔,；洗滌時每孔注入的洗液不夠，或洗滌次數(shù)不夠,；液體過多溢出污染,；浸泡時間過短；

3 顯色劑保存不當,，或孵育時未避光,，造成非特異性顯色,；

4 孵育溫度過高，或孵育時間過長,；

5 不同試劑盒組分混用或替代,，產(chǎn)生基質(zhì)效應或非特異性吸附，導致假陽性結(jié)果,。

三,、標曲正常，樣本孔全黃

讀值計算后,，發(fā)現(xiàn)標曲擬合效果良好,，但樣本OD超過標曲最大OD，表明樣本還需要稀釋哦,。

四,、 黑色

例：加入終止液后，酶標板孔中液體變黑,，或產(chǎn)生黑色沉淀,。

可能原因：

1、HRP酶濃度過高：準備HRP酶工作液時,，保證計算和配制體積準確,，按照說明書中的洗滌體積、時間,、次數(shù)進行洗板,；

2、樣本中指標濃度過高,，樣本還需要稀釋,；

3、終止液中硫酸濃度過高或變質(zhì)：終止液是1M H2SO4,，混用過高濃度的硫酸可能導致炭化反應,。