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技術(shù)文章

實驗室ELISA封閉劑特性介紹

閱讀:448          發(fā)布時間:2024-4-16

   酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實驗室技術(shù),是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理,對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法。封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程,。抗原或抗體包被時所用的濃度較低,,吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,,封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥在ELISA試劑盒其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。在免疫學(xué)實驗中,,通常使用封閉劑來減少非特異性結(jié)合。常用的封閉劑有脫脂奶粉,,BSA,,血清以及 Fab 片段單鏈二抗等。根據(jù)不同的平臺選擇相應(yīng)的封閉劑,。

1,、脫脂奶粉

作用原理:脫脂奶粉含有多種蛋白,可以封閉未吸附蛋白的固相載體(WB 膜,、ELISA 板等)位點,,減少抗體與之結(jié)合的概率,避免非特異性結(jié)合帶來的高背景,。

優(yōu)點:價格便宜,,因含多種不同分子量的蛋白,故封閉起來更全面。

缺點:成分復(fù)雜,,適用范圍窄,。不適用于生物素和堿性磷酸酶標記的抗體系統(tǒng)。且封閉后的載體不易長期保存,,因此在試劑盒的生產(chǎn)中較少應(yīng)用,。

2、牛血清白蛋白BSA

作用原理:同脫脂奶粉,,封閉未吸附蛋白的固相載體位點,。

優(yōu)點:成分單一,,適用于 ELISA 實驗,,生物素、堿性磷酸酶系統(tǒng)的免疫學(xué)檢測實驗或者其他對特異性要求較高的實驗,。

缺點:大部分 BSA 中有少量的抗體殘留,,會導(dǎo)致抗原/抗體之間的交叉反應(yīng),造成一定背景,。

3,、動物血清

作用原理:

1、待檢樣本會有些與蛋白非特異性結(jié)合的物質(zhì),,從而導(dǎo)致背景過高,,因此可以用血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合,從這點看,,血清和 BSA 沒有明顯區(qū)別,;

2、待檢樣本中可能會有 Fc 受體,,可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合,,而封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本 Fc 受體之間結(jié)合,。BSA 則無法封閉 Fc 受體,。

優(yōu)點:因為血清可以封閉 Fc 受體及減少抗體間的非特異性結(jié)合,故在免疫組化,、免疫熒光實驗中有廣泛應(yīng)用,。

缺點:某些封閉血清中可能含有疊氮鈉,因此不適用于 HRP 酶標的檢測體系,。

4,、Fab 片段單鏈二抗

作用原理:由于二價的抗體(全 IgG 或 F(ab’)2 片段)有兩個結(jié)合位點,不能用來封閉,。而 Fab 片段單鏈二抗只有一個結(jié)合位點,,因此可全封閉免疫球蛋白。

應(yīng)用:在 IHC 或 IF 雙標/多標實驗中,封閉樣本表面的免疫球蛋白,,封閉組織切片或細胞表面的內(nèi)源性免疫球蛋白,,并可解決兩個一抗來自同一種屬的麻煩。

5,、無蛋白封閉劑---新型高效封閉劑

Blocker 無蛋白封閉劑,,該封閉劑是通過化學(xué)合成高親水性化合物,不存在生物封閉劑所擔心的生物安全性,、質(zhì)量,、批間差等問題。

主要特點:

1)與微球表面活化的羧基偶聯(lián)形成穩(wěn)定的共價鍵

2)純化學(xué)合成,,批間差小,,純度高

3)空間結(jié)構(gòu)簡單,更充分的封閉微球表面,,降低微球非特異性吸附,,減少基質(zhì)干擾

4)提高試劑靈敏度

5)含大量親水基團,有利于提高試劑穩(wěn)定性

應(yīng)用領(lǐng)域:乳膠免疫比濁試劑/ 化學(xué)發(fā)光試劑 ,,代替 BSA 作為封閉劑或與 BSA 聯(lián)合封閉,。

6、免疫試劑穩(wěn)定液

免疫試劑穩(wěn)定液主要用于免疫分析檢測試劑/抗原/抗體/蛋白的保存.  該產(chǎn)品屬于即用型,,無需稀釋,,使用簡單方便,將待保存物質(zhì)溶于穩(wěn)定液中后置于冰箱即可,。免疫試劑穩(wěn)定   液有利于維持蛋白的三維結(jié)構(gòu),,保持蛋白的生物活性,可延長免疫分析試劑及蛋白的使用期限,,確保產(chǎn)品的性能,。

應(yīng)用領(lǐng)域:

1)免疫分析試劑保存, 如免疫比濁檢測試劑/化學(xué)發(fā)光檢測試劑

2)蛋白質(zhì)保存,如抗原/抗體/酶類等


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