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培養(yǎng)基的制備和性能測試分述
閱讀：878 發(fā)布時間：2024-2-26培養(yǎng)基是液體,、半固體或固體形式的,，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì),。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié),，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當,、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準確性,。公司對微生物實驗室在培養(yǎng)基購置、貯存,、制備,、使用等方面應采取的質(zhì)量控制措施進行討論，提一些建議,。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作,。
干粉培養(yǎng)基應保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射;未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長保存2年,，開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕,，應注意防潮并在6個月內(nèi)用完。應定期對儲存中的培養(yǎng)基進行常規(guī)檢查,，如容器密閉性復查,、第1次開封日期、內(nèi)容物的感官檢查,，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊,、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。
一,、培養(yǎng)基的制備
1.培養(yǎng)基用水
培養(yǎng)基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水,，最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。
2.稱量
稱量時要用專用的角匙,，避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果;干粉培養(yǎng)基易吸潮,，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基,。
3.復水
復水時不得用銅鍋或鐵鍋,，以防有離子混入培養(yǎng)基中,，影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中,，培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基,，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘;加熱培養(yǎng)基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基,。為避免燒焦和沸騰溢出,，對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞,，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì),，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出,，該培養(yǎng)基即不能使用,，應重新制備。對于瓊脂類培養(yǎng)基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱,，最多只能加熱兩次,，第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應棄去。
4.滅菌
一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌,，即高壓蒸汽滅菌,，通常是121℃ 15min，含糖或特殊培養(yǎng)基,，按照或生產(chǎn)商提供的說明滅菌,。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分,，改變培養(yǎng)基的酸堿度,。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，還會使瓊脂的凝膠強度下降,，因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復滅菌,。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定,，并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。
5.pH測定
微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性,。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值,，即培養(yǎng)基使用前的pH，并應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,，固體瓊脂培養(yǎng)基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量,。使用過程中，如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的pH,，應用1mol/LNa0H或 lmol/LHCL調(diào)整,，注意不可反復調(diào)pH,，否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。
6.配制好的培養(yǎng)基保存
滅菌以后培養(yǎng)基應該迅速冷卻至所需溫度,，避免長時間保存在滅菌鍋內(nèi),，造成過度滅菌，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果,。所配制的培養(yǎng)基的量,，應該是在最長保存期限內(nèi)正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完,，應于冷藏保存,，如果保存時間超過2天，應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時間超過2個星期,，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā),。
二、培養(yǎng)基的性能測試
1.外觀控制
制備好的培養(yǎng)基應有相應的顏色,，一般的培養(yǎng)基應澄清,、無渾濁、無沉淀,。使用前應檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化,，是否蒸發(fā)/脫水。
2.污染控制
從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進行污染測試(無菌試驗),，確定無微生物生長方可使用,。
3.性能測試
(1)測試菌株選擇 測試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實驗室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株，應來自國際/菌種保藏中心ATCC標準菌株,，菌株的選擇參考衛(wèi)生WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗規(guī)程》,。
(2) 定量測試方法（改良Miles-Misra法） 測試菌株過夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區(qū)域并標記;從最高稀釋度開始，分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區(qū)域;將稀釋液涂滿整個1/4區(qū)域,，37°C培養(yǎng)18小時;對易計數(shù)的區(qū)域計數(shù),，按公式計算生長率(生長率=待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)/參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù))。非選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.7,，該類培養(yǎng)基應易于目標菌生長;選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.1,。
(3)半定量測試方法（改進的劃線法接種法） 平板分ABCD四區(qū)，共劃16條線,，平行線大概相隔0.5cm,，每條有菌落生長的劃線記作1分，每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分,，沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分,，分數(shù)加起來得到生長指數(shù)G。目標菌在培養(yǎng)基上應呈現(xiàn)典型的生長,，而非目標菌的生長應部分或全被抑制,，目標菌的生長指數(shù)G大于6時,，培養(yǎng)基可接受。
(4)定性測試方法（平板接種觀察法） 用接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物,，在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線,。按標準中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度對接種后的平板進行培養(yǎng)，目標菌應呈現(xiàn)良好生長,，并有典型的菌落外觀,、大小和形態(tài)，非目標菌應是微弱生長或無生長,。
總之,，培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物實驗室檢測工作的基礎(chǔ)，事關(guān)檢測工作的準確性,、可靠性,，在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環(huán)節(jié)的質(zhì)量問題,，都將導致檢驗結(jié)果科學性,、客觀性的偏離。因此,，加強培養(yǎng)基的實驗室質(zhì)量控制,，認真地做好培養(yǎng)基的質(zhì)控工作，不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平,，才能為微生物檢測實驗室提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基,。