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培養(yǎng)基的制備和性能測試分述
閱讀：575 發(fā)布時(shí)間：2024-2-26培養(yǎng)基是液體,、半固體或固體形式的,，含天然或合成成分,，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì),。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣,、保存是否得當(dāng),、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。公司對微生物實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)基購置,、貯存,、制備、使用等方面應(yīng)采取的質(zhì)量控制措施進(jìn)行討論,，提一些建議,。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。
干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處,，要避免陽光直射;未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長保存2年,，開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并在6個(gè)月內(nèi)用完,。應(yīng)定期對儲存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查,，如容器密閉性復(fù)查、第1次開封日期,、內(nèi)容物的感官檢查,，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用,。
一,、培養(yǎng)基的制備
1.培養(yǎng)基用水
培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水,。
2.稱量
稱量時(shí)要用專用的角匙,，避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果;干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件,，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基,。
3.復(fù)水
復(fù)水時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長;容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上,，避免在加熱溶解過程中,，培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘;加熱培養(yǎng)基時(shí)一定要進(jìn)行攪拌,，特別是瓊脂類培養(yǎng)基,。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進(jìn)行加熱,。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞,，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)焦化,，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出,，該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備,。對于瓊脂類培養(yǎng)基進(jìn)行再融化時(shí)應(yīng)使用沸水浴或流動(dòng)蒸汽進(jìn)行加熱,，最多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去,。
4.滅菌
一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌,，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃ 15min,，含糖或特殊培養(yǎng)基,，按照或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌,，避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分,，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,，還會使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降,，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復(fù)滅菌,。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定,，并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。
5.pH測定
微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性,。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值,，即培養(yǎng)基使用前的pH，并應(yīng)在25℃溫度下采用精密酸度計(jì)進(jìn)行測量,，固體瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)以特殊的膠體表面測量電極進(jìn)行測量,。使用過程中，如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的pH,，應(yīng)用1mol/LNa0H或 lmol/LHCL調(diào)整，注意不可反復(fù)調(diào)pH，否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓,。
6.配制好的培養(yǎng)基保存
滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度,，避免長時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過度滅菌,，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果,。所配制的培養(yǎng)基的量，應(yīng)該是在最長保存期限內(nèi)正好使用完,。含染料的培養(yǎng)基應(yīng)閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當(dāng)天未使用完,，應(yīng)于冷藏保存，如果保存時(shí)間超過2天,，應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過2個(gè)星期,，應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。
二,、培養(yǎng)基的性能測試
1.外觀控制
制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色,，一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無渾濁,、無沉淀,。使用前應(yīng)檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)/脫水,。
2.污染控制
從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進(jìn)行污染測試(無菌試驗(yàn)),，確定無微生物生長方可使用。
3.性能測試
(1)測試菌株選擇 測試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株,，應(yīng)來自國際/菌種保藏中心ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株,，菌株的選擇參考衛(wèi)生WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程》。
(2) 定量測試方法（改良Miles-Misra法） 測試菌株過夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個(gè)區(qū)域并標(biāo)記;從最高稀釋度開始,，分別滴一滴稀釋液于試驗(yàn)平板和對照平板標(biāo)記好的區(qū)域;將稀釋液涂滿整個(gè)1/4區(qū)域,，37°C培養(yǎng)18小時(shí);對易計(jì)數(shù)的區(qū)域計(jì)數(shù)，按公式計(jì)算生長率(生長率=待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)/參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)),。非選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率應(yīng)不低于0.7,，該類培養(yǎng)基應(yīng)易于目標(biāo)菌生長;選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率應(yīng)不低于0.1。
(3)半定量測試方法（改進(jìn)的劃線法接種法） 平板分ABCD四區(qū),，共劃16條線,，平行線大概相隔0.5cm，每條有菌落生長的劃線記作1分,，每個(gè)僅一半的線有菌落生長記作0.5分,，沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分，分?jǐn)?shù)加起來得到生長指數(shù)G,。目標(biāo)菌在培養(yǎng)基上應(yīng)呈現(xiàn)典型的生長,，而非目標(biāo)菌的生長應(yīng)部分或全被抑制,，目標(biāo)菌的生長指數(shù)G大于6時(shí)，培養(yǎng)基可接受,。
(4)定性測試方法（平板接種觀察法） 用接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物,，在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間和溫度對接種后的平板進(jìn)行培養(yǎng),，目標(biāo)菌應(yīng)呈現(xiàn)良好生長,，并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài),，非目標(biāo)菌應(yīng)是微弱生長或無生長,。
總之，培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作的基礎(chǔ),，事關(guān)檢測工作的準(zhǔn)確性,、可靠性，在微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作中舉足輕重,。如果在工作中忽視任何一個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量問題,，都將導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果科學(xué)性、客觀性的偏離,。因此,，加強(qiáng)培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，認(rèn)真地做好培養(yǎng)基的質(zhì)控工作,，不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平,，才能為微生物檢測實(shí)驗(yàn)室提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基。