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酶免疫分析儀各類型的工作原理及基本結(jié)構(gòu)
閱讀：2324 發(fā)布時(shí)間：2023-12-26 酶免疫分析(enzyme immunoassay,，EIA) 是目前臨床應(yīng)用最多的一類免疫分析技術(shù),，可分為非均相(或異相)酶免疫測定和均相酶免疫測定兩種方法,。
均相酶免疫分析法（homogeneous enzyme immunoassay,，HEI） 均相酶免疫分析主要有酶擴(kuò)大免疫測定技術(shù)和克隆酶供體免疫測定兩種方法,。
非均相酶免疫分析法（heterogeneous enzyme immunoassay） 常用的酶免疫分析法多為非均相法，又可分為液相酶免疫法和固相酶免疫法兩種,，以后者常用,，稱為酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）,。ELISA是臨床上常用的免疫分析方法,，目前常用的酶免疫分析儀都是基于ELISA技術(shù)，稱為酶免疫分析儀,。
酶免疫分析儀的類型,、工作原理及基本結(jié)構(gòu)：
根據(jù)儀器結(jié)構(gòu)和自動(dòng)化程度, 針對(duì)固相支持物的不同（如微孔板、試管,、小珠,、磁微粒等）作為吸附免疫試劑的載體,，因而設(shè)計(jì)成不同的酶免疫分析儀，其基本工作原理就是分光光度法,，在光電比色計(jì)或分光光度計(jì)的基礎(chǔ)上根據(jù)ELISA技術(shù)的特點(diǎn)而設(shè)計(jì),。包括：
微孔板固相酶免疫測定儀器 國際上微孔板式ELISA使用的載體為96孔板，采用直接對(duì)微板孔測定吸光度（A）的比色計(jì),。
1,、酶標(biāo)儀
酶標(biāo)儀也稱為ELISA測讀儀（ELISA reader）,有單通道和多通道兩種類型。自動(dòng)型多通道酶標(biāo)儀有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測器,，檢測速度快,。如8通道的儀器，設(shè)有8條光束（或8個(gè)光源）,、8個(gè)檢測器和8個(gè)放大器,。多通道酶標(biāo)儀的檢測速度較快。
酶標(biāo)儀的工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)幾乎全相同（見圖16-1）,。既可以使用和分光光度計(jì)相同的單色器,，也可以使用干涉濾光片來獲單色光，此時(shí)將濾光片置于微孔板的前,、后的效果是一樣的,。
酶標(biāo)儀工作原理
酶標(biāo)儀的工作原理和光路與普通光電比色計(jì)的不同之處在于（見圖16-2） ：比色液的容器不是比色皿，而是用塑料微孔板,；酶標(biāo)儀以垂直光束通過微孔板中的待測液,；酶標(biāo)儀通常使用光密度OD來表示吸光度。現(xiàn)在大部分的酶標(biāo)儀還加上了判讀系統(tǒng)和軟件操作分析系統(tǒng)等,。
酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)簡圖
2、半自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀
半自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀在酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上再配置加液器,、溫育器,、洗板機(jī)和測讀儀等分別組成。測定中需由手工將微孔板移至下一步驟的儀器中進(jìn)行,。洗板機(jī)要求洗滌后固相表面非特異性物質(zhì)洗滌干凈,，吸液后每孔中殘留的液量極小。較精密的洗板機(jī)有可調(diào)節(jié)的定時(shí),、洗滌液定量及振蕩微孔板的功能,。
3、全自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀
自動(dòng)化酶免疫分析系統(tǒng)由加樣系統(tǒng),、溫育系統(tǒng),、洗板系統(tǒng)、判讀系統(tǒng),、機(jī)械臂系統(tǒng),、液路動(dòng)力系統(tǒng),、軟件控制系統(tǒng)等組成，這些系統(tǒng)既獨(dú)立又緊密聯(lián)系,。全自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀用在大批量標(biāo)本的檢測中,，不但提高了工作效率，而且測定的精密度亦得到改善,。微孔板式ELISA儀器均為開放式的,，即適用于所有微板式ELISA試劑。ELISA檢測結(jié)果的精密度主要取決于試劑的質(zhì)量,。全自動(dòng)ELISA儀器本身的精密度一般在3%左右,。應(yīng)用優(yōu)質(zhì)試劑測定結(jié)果的精密度，定量測定可達(dá)到7%以下,；常用的定性測定為感染性疾病抗原,、抗體的檢測，精密度在10%左右,。
4,、管式固相酶免疫測定儀
應(yīng)用管式固相載體的ELISA分析儀器不多，在我國應(yīng)用的有：
① 1990年德國推出的全自動(dòng)管式ELISA分析系統(tǒng)和配套試劑,。試劑包括用鏈霉親和素包被的聚苯乙烯管,、生物素結(jié)合的抗原或抗體，辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體和顯色底物ABTS,。測定中標(biāo)準(zhǔn)曲線可使用2星期,，每次測定只需一點(diǎn)定標(biāo)。測定的精密度CV在3%左右,。測定項(xiàng)目齊全,，包括激素、腫瘤標(biāo)志,、心肌標(biāo)志和感染性疾病的抗原,、抗體等,。② 法國生產(chǎn)的是一種特殊形狀的管式全自動(dòng)ELISA的分析儀,，配套使用一個(gè)特別的“試劑條"（reagent strip）,。
5、微粒固相酶免疫測定儀
美國生產(chǎn)自動(dòng)酶免疫分析儀應(yīng)用聚苯乙烯微粒（顆粒直徑0.47μm）作為固相,，特異抗體或抗原包被在微粒上,。第一次抗原抗體反應(yīng)后，將反應(yīng)液通過特制的玻璃纖維膜,，聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纖維膜上,，液體則通過膜濾出。以后的反應(yīng)在膜上進(jìn)行,，用過濾方式洗滌,。標(biāo)記酶為堿性磷酸酶,，底物為4-甲基傘酮磷酸酶，反應(yīng)后進(jìn)行熒光測定,。其后生產(chǎn)的作藥物測定的熒光偏振分析儀與一體多項(xiàng)目全自動(dòng)免疫分析儀也在檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用,。
6、磁微粒固相酶免疫測定儀
磁微?？捎么盆F吸引與液相分離,，是免疫測定中較為理想的固相載體，較早應(yīng)用磁微粒作為酶免疫測定固相的是瑞士出品的分析系統(tǒng),，由分光光度測讀儀,、磁鐵板和試劑3部分組成。試劑包括抗異硫氰酸熒光素（FITC）抗體,，特異抗體或抗原包被的磁微粒（顆粒直徑1μm）,，F(xiàn)ITC結(jié)合的特異抗體或抗原，堿性磷酸酶標(biāo)記的特異抗體或抗原及底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯,。其應(yīng)用的抗FITC-抗體是與親和素-生物素原理相同的間接包被系統(tǒng),，反應(yīng)模式與電化學(xué)發(fā)光免疫測定亦相似。反應(yīng)在試管中進(jìn)行,，基本上用手工操作,。反應(yīng)結(jié)束后將試管架放在磁鐵板上，磁微粒被磁鐵吸引至管底,，完成固相與液相的分離,。酶作用后反應(yīng)液呈粉紅色。