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小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)標(biāo)本收集事項(xiàng)
閱讀：632 發(fā)布時(shí)間：2023-10-23做ELISA實(shí)驗(yàn),，在處理樣本前應(yīng)該先了解收集樣本的注意事項(xiàng),。
一、標(biāo)本收集注意事項(xiàng)：
1.收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原,，無(wú)內(nèi)毒素試管,。
2.血清和血漿避免使用溶血，高血脂標(biāo)本,。
3.標(biāo)本應(yīng)清澈透明,，懸浮物應(yīng)離心去除,。
4.標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，需按一次使用量分裝,，凍存于-20℃,，-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融,。
5.可根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際情況,，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)) ,。
6.收集標(biāo)本,，盡量做到雙份的用量，避免一次實(shí)驗(yàn)失敗,，重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本缺失,，從而耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
7.收集標(biāo)本時(shí),，應(yīng)該做好防護(hù)措施(比如戴手套,，口罩，護(hù)目鏡等),，認(rèn)為所有標(biāo)本都具有一定的潛在危險(xiǎn)性,。
8.樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜,。
樣本正確的處理方法應(yīng)該是這樣的：
二,、標(biāo)本處理辦法：
1.血清：將采集的全血靜置冰箱4℃過(guò)夜，然后1000-3000rpm離心10分鐘,，取上清立即測(cè)試,，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
2.血漿：用EDTA,，枸櫞酸鈉,，肝素等作為抗凝劑，加入血液混勻后,，1000-3000rpm離
心10分鐘,，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)
保存,。
3.組織勻漿：切取組織塊,，0.01MPBS中過(guò)洗一次；按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,，在冰水中勻漿,。勻漿完成后，5000-10000rpm離心10分鐘,，取上清立即測(cè)試,，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存,。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試,，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存,。
5.尿液，腹水,，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘,，取上清立即測(cè)試,，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃3-6個(gè)月)保存,。
注：樣品稀釋的一般原則。
ELISA實(shí)驗(yàn)加樣時(shí)可能遇到的問題：
1,、過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)),。
2、手工操作中,，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間,。
3、加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外,，血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣,。
ELISA實(shí)驗(yàn)相應(yīng)解決辦法：
1、標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后,，再用3000rmp離心15分鐘,。
2、標(biāo)本為血漿：須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘,。
3,、若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中,，若要貯存,，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
4,、加樣后及時(shí)放入孵箱,。
5、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干,。
6,、如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。
7,、標(biāo)本較多時(shí),，請(qǐng)分批操作。