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做ELISA實驗，在處理樣本前應該先了解收集樣本的注意事項,。
 

　　一,、標本收集注意事項：
 

　　1.收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管,。
 

　　2.血清和血漿避免使用溶血，高血脂標本,。
 

　　3.標本應清澈透明,，懸浮物應離心去除,。
 

　　4.標本收集后若不及時檢測，需按一次使用量分裝,，凍存于-20℃,，-80℃電冰箱內，避免反復凍融,。
 

　　5.可根據標本的實際情況，做適當倍數稀釋(建議做預實驗,，以確定稀釋倍數) ,。
 

　　6.收集標本，盡量做到雙份的用量,，避免一次實驗失敗，重復實驗時標本缺失,，從而耽誤實驗進程,。
 

　　7.收集標本時，應該做好防護措施(比如戴手套,，口罩,，護目鏡等)，認為所有標本都具有一定的潛在危險性,。
 

　　8.樣本處理應該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜,。
 

　　樣本正確的處理方法應該是這樣的：
 

　　二,、標本處理辦法：
 

　　1.血清：將采集的全血靜置冰箱4℃過夜，然后1000-3000rpm離心10分鐘,，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存,。
 

　　2.血漿：用EDTA,，枸櫞酸鈉，肝素等作為抗凝劑,，加入血液混勻后，1000-3000rpm離
 

　　心10分鐘,，取上清立即測試,，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)
 

　　保存,。
 

　　3.組織勻漿：切取組織塊，0.01MPBS中過洗一次,；按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,，在冰水中勻漿。勻漿完成后,，5000-10000rpm離心10分鐘，取上清立即測試,，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存,。
 

　　4.細胞培養(yǎng)上清：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試,，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
 

　　5.尿液,，腹水,，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存,。
 

　　注：樣品稀釋的一般原則。
 

　　ELISA實驗加樣時可能遇到的問題：
 

　　1,、過長(特別是室內溫度較高時)。
 

　　2,、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間,。
 

　　3,、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外，血清或血漿標本分離不好即進行加樣,。
 

　　ELISA實驗相應解決辦法：
 

　　1、標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后,，再用3000rmp離心15分鐘,。
 

　　2、標本為血漿：須使用含抗凝劑的血液標本收集管,，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后,，3000rpm離心15分鐘,。
 

　　3、若在幾天內檢測,，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存,，則置于-20℃的低溫冰箱內,。
 

　　4、加樣后及時放入孵箱,。
 

　　5、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干,。
 

　　6,、如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。
 

　　7、標本較多時,，請分批操作,。