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1、蛋白酶抑制劑
     破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中,，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。蛋白酶抑制劑（protease inhibitor）從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團(tuán)結(jié)合,，使蛋白酶活力下降,，甚至消失，但不使酶蛋白變性的物質(zhì),。各種蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同,，因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低,，尤其應(yīng)注意在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑時(shí)應(yīng)充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀,。

常用的蛋白酶抑制劑和各自作用特點(diǎn)如下：

(1) 苯甲酰磺酰氟（PMSF）：抑制絲氨酸蛋白酶（如胰凝乳蛋白酶,，胰蛋白酶,，凝血酶）和巰基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）；

(2) 乙二胺四乙酸（EDTA）：作為螯合劑可逆抑制金屬蛋白水解酶,；

(3) 胃蛋白酶抑制劑（pepstantin）：抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶,，血管緊張肽原酶，組織蛋白酶D和凝乳酶,；

(4) 亮抑蛋白酶肽（leupeptin）：可逆抑制絲氨酸,、半胱氨酸蛋白酶和巰基蛋白酶，如木瓜蛋白酶,，血漿酶和組織蛋白酶B,；

(5) 胰蛋白酶抑制劑（aprotinin）：競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶,，血管舒緩素,，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶；

(6) AEBSF：一種水溶性的絲氨酸蛋白酶不可逆抑制劑,，其抑制常數(shù)與PMSF和DFP的抑制常數(shù)相似，可以有效抑制胰蛋白酶（trypsin）,、糜蛋白酶（chymotrypsin）,、纖溶酶（plasmin）、激肽釋放酶（kallikrein）和凝血酶（thrombin）等蛋白酶,，作為PMSF和DFP的替代物,，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液穩(wěn)定性更好。

(7) 烏苯美司（I Ubenimex,，NN,，也稱為bestatin）：競(jìng)爭(zhēng)性，可逆的氨基肽酶抑制劑,，對(duì)精氨酰氨基肽酶（氨基肽酶B）,，白三烯A4水解酶（顯示環(huán)氧化物水解酶和氨基肽酶活性的鋅金屬蛋白酶），丙氨酰氨基肽酶（氨肽酶M /N）,，亮氨酰/胱氨酰氨基肽酶（催產(chǎn)素/血管加壓素酶）（白三烯D4水解酶）有抑制作用,；

(8) N-（反式-環(huán)氧丁二酰基）-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺（E64）：半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制劑,；

(9) 胃酶抑素A（Pepstatin A）：天冬氨酸蛋白酶可逆抑制劑,。

2、磷酸酶抑制劑

     細(xì)胞或組織裂解時(shí)會(huì)釋放出大量?jī)?nèi)源性蛋白磷酸酶,，以各種方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化,，從而影響后續(xù)的蛋白檢測(cè)。因此在提取物中適量添加外源性磷酸酶抑制劑,，有利于在之后的Western blotting,、免疫共沉淀檢測(cè)磷酸化蛋白質(zhì)和蛋白激酶活性測(cè)定等實(shí)驗(yàn)過程中抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，維持蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài),。

常見的磷酸酶有蛋白酪氨酸磷酸酶,、堿性磷酸酶和酸性磷酸酶，常用的磷酸酶抑制劑如下：

(1) 氟化鈉（sodiμm fluoride）：酸性磷酸酶可逆抑制劑,；

(2) 焦磷酸鈉（sodiμm pyrophosphate）：絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶不可逆抑制劑,；

(3) β-甘油磷酸（β-glycerophosphate）：絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶可逆抑制劑；

(4) 正釩酸鈉（sodiμm orthovanadate）：堿性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶可逆抑制劑：

(5) 鉬酸鈉（sodiμm molybdate）：酸性磷酸酶不可逆抑制劑,；

(6) 二水酒石酸鈉（sodiμm tartrate dihydrate）：酸性磷酸酶可逆抑制劑,；

(7) 咪唑（imidazole）：堿性磷酸酶可逆抑制劑。