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ELISA試劑盒實驗包被條件選擇指南：

1,、包被抗原的選擇

包被抗原可分為天然蛋白,、重組蛋白和小分子抗原三大類。 天然蛋白需經純化才能用直接吸附法包被,，對于含雜質較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應的物質如抗體直接吸附在酶標板上,，再通過特 異性反應使抗原固相化)。經純化的重組蛋白一般皆可直接包板,。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物,，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標板 上,，一般都先使其與無關蛋白質如BSA等偶聯(lián),，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。

2,、包被液的選擇

一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,，如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液,。

3,、包被溫度的選擇

通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時，我們強烈建議4-8度條件下包被,，有利于蛋白活性的保持,。

4、 包被濃度的選擇

包被的適濃度隨固相載體和包被物的性質變化,，一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml,，要明確針對特定包被抗原的適包被濃度需要通過實驗來確定。包板后需要封閉嗎?應該選擇什么樣的封閉體系?封閉是否必要,，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件,。一般說來，雙抗體夾心法,，只要酶標記物 是高活性的,，操作時洗滌徹di，不經封閉也可得到滿意的結果,。而在間接法測定中,，封閉一般是必須的,。常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA,、 10%的小牛血清、1%明膠,、5%的脫脂奶粉,，AbMART推薦使用5%脫脂奶粉,，價廉而且封閉能力強，不過5%脫脂奶粉只適合短期內使用,，不宜長期保 存,，所以ELISA試劑盒中較少使用。