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ELISA吸光度值衰減探究
閱讀:818 發(fā)布時(shí)間:2023-4-20在做elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,ELISA吸光值一直在衰減這樣的現(xiàn)象,。在加完顯色液(購買)顯色一定時(shí)間后,,再加終止液(2M H2SO4,,自己配制)后,,立即測試其吸光度值,,等過幾分鐘再測試吸光度值,,發(fā)現(xiàn)兩次測得的吸光度值發(fā)生衰減。第二次均小于次,。并且,,加終止液時(shí),從條加到第12條后,,測試發(fā)現(xiàn),,吸光度值從1-12條逐級(jí)衰減。前提是這12條酶標(biāo)板都是同一種產(chǎn)品,,并且包被相同蛋白,。原來ELISA吸光度值衰減可以這樣巧妙應(yīng)對(duì)。
其實(shí)具體的原因也很簡單,,有可能是顯色液的質(zhì)量不夠好,。一般情況下,終止反應(yīng)后OD值的下降前期不是很明顯,。終止后,,吸光度值是會(huì)隨著時(shí)間衰減,所以一般是加完終止液后立即測,,這樣比較準(zhǔn),。再次分析12條顯示逐級(jí)遞減的原因看看是否是:
1、 顯色時(shí)間調(diào)整,如果你現(xiàn)在的顯色時(shí)間是10MIN,,那調(diào)整到30MIN,,再加終止液,觀察上述現(xiàn)象是否出現(xiàn)。
2,、 終止液中加入少量甘油看下怎么樣,。建議您使用RD品牌的ELISA試劑盒,顯色時(shí)間是30分鐘,,終止后要求在30分鐘內(nèi)檢測,,加入終止液后,在加入終止液后2到3分終內(nèi)檢測,,這是OD值相對(duì)比較高,。擬合值能達(dá)到四個(gè)9。