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  在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育,，有人稱之為孵育,，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。

  溫育常采用的溫度有43℃,、37℃,、室溫和4℃等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度,。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明,，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2小時(shí),，產(chǎn)物的生成可達(dá)ding峰,。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度,，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為徹di,，在放射免疫測(cè)定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜，以形成最多的沉淀,。但因所需時(shí)間太長,，在ELISA試劑盒中一般不予采用。

  ELISA屬固相免疫測(cè)定,，抗原,、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標(biāo)本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個(gè)逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育。

  保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,，一般均采用水浴,，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面,，使溫度迅速平衡,。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,，此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,，ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi),，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布,，最后將ELISA板放在濕紗布上,。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此,。無論是水浴還是濕盒溫育,，反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng),，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20～25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求控制溫育,。

室溫溫育時(shí),，ELISA試劑盒只要平置于操作臺(tái)上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。為保證這一點(diǎn),，一個(gè)人操作時(shí)，一次不宜多于兩塊板同時(shí)測(cè)定,。