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  在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,，即加標本和加酶結合物后,。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,，這一保溫過程稱為溫育,，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當,。

  溫育常采用的溫度有43℃,、37℃、室溫和4℃等,。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研究時,，實驗表明,，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1～2小時,，產物的生成可達ding峰,。為加速反應，可提高反應的溫度,，有些試驗在43℃進行,，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應4℃更為徹di,，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜，以形成最多的沉淀,。但因所需時間太長,，在ELISA試劑盒中一般不予采用。

  ELISA屬固相免疫測定,，抗原,、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此,。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育,。

  保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,，一般均采用水浴，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中,，ELISA板底應貼著水面,，使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),，板上應加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上,。若用保溫箱,，ELISA試劑盒應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,，在盒底墊濕的紗布,，最后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)定的溫度,，特別是在氣溫較低的時候更應如此,。無論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放,，以保證各板的溫度都能迅速平衡,。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴格限制在規(guī)定的范圍內,，標準室溫溫度是指20～25℃,，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。

室溫溫育時,，ELISA試劑盒只要平置于操作臺上即可,。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。為保證這一點,，一個人操作時,，一次不宜多于兩塊板同時測定。