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敘述細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染源
閱讀:1133 發(fā)布時(shí)間:2022-11-1細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動(dòng)物或植物體內(nèi)取出,,然后在適宜的人工環(huán)境中生長(zhǎng)的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離,,也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株,。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行,在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中,,把細(xì)胞處理好,,根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基,放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中,,再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果操作不當(dāng)或者條件控制不合適容易受到化學(xué)或者生物因素的污染,常見的污染源有:
1.細(xì)菌污染
細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染,,即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素,,也可能因?yàn)椴僮鞑簧鞫鹞廴尽3R姷挠懈锾m氏陽性菌,,如枯草桿菌以及大腸桿菌,、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,其中又以白色葡萄球菌較常見,。
培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后,,會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,,pH改變。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變,,胞內(nèi)顆粒增多,、增粗,后變圓脫落死亡,。
2.真菌污染
真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一種,,常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌,、孔子霉,、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌,。
培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后,,可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點(diǎn),有的散在生長(zhǎng),,培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁,;倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯(cuò)在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中,,有的呈鏈狀排列,。
真菌污染后,細(xì)胞生長(zhǎng)變慢,,但后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡,。
3.支原體污染
支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨(dú)立生活的小微生物,小直徑0.2μm,,一般過濾除菌無法去除它,,光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。開始不易發(fā)現(xiàn),,能在偏堿條件下生存,,對(duì)青霉素有抗藥性。多吸附于細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間,。
培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后,,部分敏感細(xì)胞可見細(xì)胞生長(zhǎng)增殖變慢,部分細(xì)胞變圓,,從瓶壁脫落,。但多數(shù)細(xì)胞污染后無明顯變化,或略有變化,,若不及時(shí)處理,,還會(huì)產(chǎn)生交叉污染。
4.病毒污染
組織細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,如果沒有除去潛在的病毒,,就會(huì)產(chǎn)生病毒污染,。目前,從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒,。
盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),,但疫苗是不安全的。因此,,潛在病毒是細(xì)胞大量和疫苗,、干擾素等生物制品制作中的難題。