日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

  目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺y三酯法。該方法具有高效,、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點,。主要是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成，由待合成引物的3'端向5'端合成延伸,，相鄰的核苷酸通過3'→5'磷酸二酯鍵連接,。

固相亞磷酰胺三酯法合成引物的具體步驟如下：

1) 用三lv乙酸去除固相載體5'-羥基的保護基團DMT，獲得游離的5'-羥基,；

2) 將亞磷酰胺保護核苷酸單體與活化劑四氮唑混合,，得到核苷亞磷酸活化中間體，與游離的5'-羥基發(fā)生縮合反應(yīng),；

3) 由于無法*的5'-羥基都參與縮合,，可能有極少數(shù)5'-羥基沒有參加反應(yīng)(少于2%)，可用乙酸酐和1-甲基咪唑試劑將其終止合成,，這種短片段可以在純化時分離掉；

4) 在氧化劑的作用下,，亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯,，使DNA磷酸骨架更穩(wěn)定。

經(jīng)過以上四個步驟,，一個脫氧核苷酸就被連接到固相載體上,。重復(fù)以上步驟，直到所有要求合成的堿基連接完成,。合成過程中可以監(jiān)控脫下的保護基團DMT的顏色可以初步判定合成效率,。

引物純化方式選擇：

1、C18柱脫鹽：

有人稱其為簡易反相柱,，它對DNA有特異性的吸附,，可以被有機溶解洗脫，但不會被水洗脫,，所以能有效地去除鹽分,。它不能有效去除比目的片段短的小片段。實際上,，它是一種脫鹽的作用,。這種方法一般不會對普通PCR反應(yīng)產(chǎn)生影響。對于需要用于測序,、克隆的引物不能使用這個級別,。
2,、OPC純化： 

OPC純化是根據(jù)DNA保護基（DMTr基）和Cartridge柱中樹脂間的親合力作用的原理進行純化目的DNA片段。OPC法純化的DNA純度大于95%,。適用于40mer以下引物的純化,。
3、PAGE純：

PAGE純化法是使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,，對DNA片段進行分離,，然后從凝膠中回收目的DNA的方法。PAGE純化法也是一種非常有效的DNA純化方法,，純化后的DNA純度大于95%,，對長鏈Oligo DNA (大于50mer)的純化特別有效。
4,、HPLC純化：

HPLC純化是使用高效液相色譜的原理,，對DNA片段進行純化。純度可以大于99%,。主要用于短鏈和修飾引物的純化,。該法的弱點是成本較高，批量效率不高,。