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細(xì)胞衰老是細(xì)胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退,、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象,。衰老的細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞體積變大,，呈扁平狀；細(xì)胞核變大,，核膜內(nèi)陷,，染色質(zhì)聚集、固縮,、裂解,；胞質(zhì)內(nèi)顆粒增加，有空泡形成,；線粒體的數(shù)目及形狀發(fā)生改變；膜流動(dòng)性降低,；溶酶體內(nèi)容物增多,，導(dǎo)致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老細(xì)胞所具有的上述特征成為各種細(xì)胞衰老檢測手段的依據(jù),。

細(xì)胞衰老檢測方法與步驟:

（1）細(xì)胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅菌的細(xì)胞片,，每孔加入1×10E5個(gè)細(xì)胞，37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)過夜,，使細(xì)胞在細(xì)胞片上生長,。

（2）在超凈工作臺(tái)中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液，加入×1 PBS,，洗滌細(xì)胞1次,，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室溫條件下固定3~5分鐘,。

（3）吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,，加入×1 PBS，洗滌細(xì)胞3次,，每次3分鐘,。

（4）吸棄×1 PBS，加X-Gal溶液以浸沒細(xì)胞片為宜,，37℃孵育4~8小時(shí)或過夜,，用保鮮膜包被6孔培養(yǎng)板以防染液蒸發(fā)。

（5）取出細(xì)胞爬片,，去離子水沖洗2次,，再次用固定液固定4分鐘，流水輕輕沖洗,。

（6）將細(xì)胞爬片按此順序脫水,、透明∶95%酒精I(xiàn)（2分鐘）→95%酒精Ⅱ（2分鐘）→100%酒精I(xiàn)（2分鐘）→100%酒精I(xiàn)（5分鐘）→二甲苯I（2分鐘）→二甲苯Ⅱ（2分鐘）。

（7）中性樹膠封片,。

（8）在普通光學(xué)顯微鏡下觀察衰老細(xì)胞形態(tài),。

每張片子鏡下計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞,，確定X-Gal染色陽性細(xì)胞（衰老細(xì)胞）在細(xì)胞群體中的所占的百分比即衰老細(xì)胞率（藍(lán)染細(xì)胞數(shù)/總計(jì)細(xì)胞數(shù)×100%）。

細(xì)胞衰老檢測注意事項(xiàng):

①X-Gal溶液需要現(xiàn)用現(xiàn)配,。

②細(xì)胞固定時(shí)間過長或固定之后清洗不干凈,，均會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)。