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細胞遷移步驟實驗方法
閱讀:1638 發(fā)布時間:2022-9-13細胞遷移即細胞劃痕法,,是測定細胞遷移運動與修復能力的方法,類似體外傷口愈合模型,。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上,,用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線,去除中央部分的細胞,,然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設定的時間,,取出細胞培養(yǎng)板,觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區(qū),,以此判斷細胞的生長遷移能力,,實驗通常需設定正常對照組和實驗組,實驗組是加了某種處理因素或藥物,、外源性基因等組別,,通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)的修復能力,可以判斷各組細胞的遷移與修復能力,。
當細胞長到融合成單層狀態(tài)時,,在融合的單層細胞上人為一個空白區(qū)域,稱為“劃痕",。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕"愈合,。
實驗方法:
1、培養(yǎng)板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標記(方便拍照時定位同一個視野),。
2,、細胞消化后接入12孔板,數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜(數(shù)量少時可培養(yǎng)一段時間至鋪滿板底),。
3,、細胞鋪滿板底后,用1ml槍頭垂直于孔板細胞劃痕,,盡量保證各個劃痕寬度一致,。(人工槍頭劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實驗結果,,這也是該方法最大的缺陷),。
4、吸去細胞培養(yǎng)液,,用PBS沖洗孔板三次,,洗去劃痕產(chǎn)生的細胞碎片,。
5、加入無血清培養(yǎng)基,,拍照記錄,。
6、將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),,每隔4-6小時取出拍照,。
7、根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結果,。