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免疫組化（IHC）是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理和特殊的標記技術(shù),，通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體顯色,，對組織細胞內(nèi)的特異性抗原進行定位,、定性,、定量檢測的一門技術(shù),。本文主要總結(jié)二抗原理及其特點,，以提供更好的選擇。

                                               IHC常用酶標二抗原理圖

1. SABC法

原理：SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)*的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì),，先將生物素與辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合,，形成生物素化HRP，然后與鏈酶親和素按一定比例混合,，形成SABC復(fù)合物,。用生物素化二抗與第一抗體結(jié)合,，再與SABC復(fù)合物聯(lián)結(jié)形成抗原～抗體～生物素化二抗～ SABC復(fù)合物。最后用底物顯色劑顯色,。

特點：該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點,。

2. SP法

原理：根據(jù)生物素(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強結(jié)合力的原理設(shè)計。在一抗（兔源與鼠源）與相應(yīng)的靶抗原結(jié)合后,，生物素化標記的抗多價二抗與一抗特異結(jié)合,；二抗上標記的生物素與標記了辣根過氧化物酶（HRP）的鏈霉親和素結(jié)合，形成抗原～特異性一抗～生物素化的二抗～HRP 標記的鏈霉親和素復(fù)合物,。

特點：該法孵育時間短（通常為10min）,，靈敏度高以及低背景染色等特點。

3. Polymer酶標二抗法

原理：該法采用一段多聚氨基酸聚合物做為載體鏈,，將該多聚物與二抗結(jié)合,，然后可再標記上多個HRP/AP酶分子，所以同樣具有很高的信號放大作用,。

特點：靈敏度高,；操作步驟簡單；無需進行內(nèi)源性的生物素封閉,。

4. 直接酶標二抗法

該法是將HRP/AP酶分子直接標記于二抗上,。因此需要普通的酶標二抗即可完成。實驗簡單,，成本低,，但是因為沒有信號放大作用，所以對很多表達豐度不是很高的抗原就可能檢測不到,。