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實驗原理:

傳代培養(yǎng)是組織培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一,。也是幾乎所有細胞生物學實驗的基礎。當細胞在培養(yǎng)瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶,，細胞才能繼續(xù)生長,。這一過程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細胞供實驗所需,。傳代要在嚴格的無菌條件下進行,，每一步都需要認真仔細的無菌操作。

傳代培養(yǎng)實驗操作步驟:
1.入無菌室之前用肥皂洗手,，用75%酒精擦拭消毒雙手,。
2.倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數(shù),。將培養(yǎng)用液置37℃下預熱,。
3.超凈臺臺面應整潔，用0.1%新潔爾滅溶液擦凈,。
4.打開超凈臺的紫外燈照射臺面20min左右,，關閉超凈臺的紫外燈，打開抽風機清潔空氣,，除去臭氧,。
5.點燃酒精燈;取出無菌試管,，巴斯德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)。
6.將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上,。
7.倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3mLHanks液洗去殘留的舊培養(yǎng)基,，或用少量胰酶涮洗一下,。
8.每個大培養(yǎng)瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌減,，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察,，當細胞收回突起變圓時立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細胞脫離胰酶,，然后將胰酶倒掉,。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
9.加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基,，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散,，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7~10mL/大瓶，3~5mL/小瓶)制成細胞懸液,，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中,。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn),，以利于CO?氣體的進入,，將培養(yǎng)瓶放回CO?培養(yǎng)箱。
10.對懸浮培養(yǎng)細胞,，步驟7-9不做,。可將細胞懸液進行離心去除舊培養(yǎng)基上清,，加入新鮮培養(yǎng)基,，然后分裝到各瓶中。