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實(shí)驗(yàn)原理:

傳代培養(yǎng)是組織培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一,。也是幾乎所有細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ),。當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)滿后就需要將其稀釋分種成多瓶,，細(xì)胞才能繼續(xù)生長(zhǎng)。這一過程就叫傳代,。傳代培養(yǎng)可獲得大量細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)所需,。傳代要在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行，每一步都需要認(rèn)真仔細(xì)的無菌操作,。

傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1.入無菌室之前用肥皂洗手,，用75%酒精擦拭消毒雙手,。
2.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否需要傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù),。將培養(yǎng)用液置37℃下預(yù)熱,。
3.超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔,，用0.1%新潔爾滅溶液擦凈,。
4.打開超凈臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20min左右，關(guān)閉超凈臺(tái)的紫外燈,，打開抽風(fēng)機(jī)清潔空氣,，除去臭氧。
5.點(diǎn)燃酒精燈;取出無菌試管,，巴斯德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi),。
6.將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上,。
7.倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基,。酌情可用2-3mLHanks液洗去殘留的舊培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下,。
8.每個(gè)大培養(yǎng)瓶加入1mL胰酶,，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察,，當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉,。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中,。
9.加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散,，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7~10mL/大瓶,，3~5mL/小瓶)制成細(xì)胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中,。蓋上瓶蓋,，適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn)，以利于CO?氣體的進(jìn)入,，將培養(yǎng)瓶放回CO?培養(yǎng)箱,。
10.對(duì)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，步驟7-9不做,?？蓪⒓?xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基,，然后分裝到各瓶中,。