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解決PCR產物中出現(xiàn)假陰性或無擴增產物（即陽性對照中有條帶,，而樣品則無條帶）方法：

　　1、條帶放置時間過久,核酸被降解,，最好在48h內進行電泳檢測,。

　　2,、DNA模板純度低，如含有雜蛋白質或Taq酶抑制劑,，可對DNA進行再次純化或重新用優(yōu)質試劑盒提取DNA; DNA濃度太低時,，可以加大模板量；對具有二級結構DNA使用較好的聚合酶,；提取DNA時,，避免吸入酚類試劑。

　　3,、對設計不合理的引物進行重新設計合成,；引物應高濃度小量分裝保存，防止多次凍融而降解失效,；檢測引物OD值并進行電泳檢測以確保兩條引物濃度一致,。

　　4、酶失活時,，更換新酶,，或新舊兩種酶同時使用，以分析是否因酶的活性喪失或不夠而導致假陰性,。

　　5,、PCR反應條件：提高變性/退火溫度；適當增加循環(huán)次數(shù),。

　　6,、Mg2+濃度過低可影響PCR擴增產量甚至使PCR擴增失敗，而Mg2+濃度過高會降低PCR的特異性,，因而可適當提高Mg2+濃度,。

　　7、如果靶序列發(fā)生突變或缺失時,，也會影響引物和模板的特異性結合,，產生假陰性結果。

　　Q3：非特異性條帶擴增或者條帶出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象

　　Answer：

　　1,、當引物特異性差或引物形成二聚體時,，可重新設計引物或者使用巣式PCR

　　2、若模板或引物濃度過高,，可適當降低模板或引物濃度

　　3,、酶量過多，則適當減少酶量

　　4,、Mg2+濃度偏高,，則降低鎂離子濃度

　　5、退火溫度偏低，適當提高退火溫度或使用二階段溫度法（94變性,，65左右退火與延伸）

　　6,、循環(huán)次數(shù)過多，不僅會降低擴增效率,，且會使錯誤摻入率增加,，因此需要減少循環(huán)次數(shù)。