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支原體污染細胞常用清除方法
閱讀：1165 發(fā)布時間：2022-4-13支原體污染細胞后，有必要清除支原體,，常用方法有：
1,、對于非重要的細胞，如培養(yǎng)中的細胞,、WCB的細胞等,，將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對于較為重要的細胞,，如來源珍貴或實驗室中細胞保藏量較小等可以采用以下（2）-（8）的方法,。
2、用MRA處理：用支原體清除劑（Mycoplasma Removal Agent）處理細胞,，作用濃度為 25μg/ml,，兩周可以清除支原體。
3,、用清洗純化法清除支原體污染的方法：細胞營養(yǎng)馴化→優(yōu)質細胞群的篩選→細胞清洗→反復離心洗滌,，其原理是利用離心力、細胞,、微生物質量和懸液的浮力差達到清除支原體的目的,。由于支原體個體小且除發(fā)酵支原體外多為細胞外寄生,所以通過反復洗滌細胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低至ji 限. 如結合敏感抗生素的抑殺作用，可達到更好的效果,。
4,、藥物輔助加溫處理：先用藥物處理后，再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,，可殺死支原體,，但對細胞有不良影響。
5,、使用支原體特異性血清：用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染,，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉為陰性,，并且5個月后仍為陰性,。
6、動物體內接種除菌法：把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物皮下或腹腔中,，借動物免疫系統(tǒng)消滅支原體,，而腫瘤細胞卻能在體內繼續(xù)生長，待一定時間后,，從體內取出細胞再進行培養(yǎng)繁殖,。
7、巨噬細胞吞噬法：從動物腹腔采取巨噬細胞,，為排除其它細胞成分,，可先進行純化，然后再加入被支原體污染的細胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng),。在培養(yǎng)過程中,，為檢查支原體是否已被消除干凈，可利用支持物培養(yǎng)法驗證,，取出支持物逐日染色,、鏡檢觀察，至支原體已被消除干凈為止,。
8,、使用支原體清除培養(yǎng)基，每2~3天更換1次新鮮培養(yǎng)液,，換液時用無菌的平衡鹽溶液洗滌細胞1~2次,；期間如果細胞密度過大，請保持細胞密度適當（貼壁細胞可能需要用胰酶消化）,，并更換新的培養(yǎng)器皿,，3天之后，即可見明顯清除效果,；處理15天后,，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅*,；如果仍有支原體殘留,，可以考慮再處理6天；為避免細胞再次受到“支原體"的污染,，以后每隔1個月進行支原體的常規(guī)檢測,，以保證沒有新的支原體污染。
注：支原體污染時細胞表現(xiàn)為長得不好,，也不死亡,，同時，培養(yǎng)基又是清亮的,，時間長達一周也沒有什么變化,，這時基本上可以判斷出是支原體污染了。