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PCR是分子生物學(xué)的常規(guī)和常用手段,，用途很多，但是都是通過(guò)擴(kuò)增目的基因片段來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

那么,，首先需要搞明白的是,，需要擴(kuò)增的基因片段大小是多大，因?yàn)椴煌笮〉幕蚱纹鋽U(kuò)增的難度是有差異的,，尤其過(guò)長(zhǎng)的片段,，需要使用不同的taq酶來(lái)進(jìn)行擴(kuò)增（比如LA taq）。幾點(diǎn)容易發(fā)生問(wèn)題的地方供參考：

1.引物,，PCR是基于引物來(lái)實(shí)現(xiàn)的,。引物是否是自己設(shè)計(jì)的？如果是,，需要檢查一下引物設(shè)計(jì)的是否合理,。如果是從文獻(xiàn)中選取的，一般出問(wèn)題的可能性不大,，不放心的可以在數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)一下,，防止文獻(xiàn)出錯(cuò)。

2.模板,，一般來(lái)講通過(guò)試劑盒提取的DNA質(zhì)量都是可以保證的,，也能在4℃冰箱放置較長(zhǎng)的時(shí)間，仍能進(jìn)行PCR擴(kuò)增,。要是通過(guò)煮沸法粗提的DNA就沒(méi)辦法放置太長(zhǎng)時(shí)間了,。一句話就是，模板DNA的濃度要合適,。

3.反應(yīng)條件,，這一塊就比較復(fù)雜了，特別是對(duì)自己設(shè)計(jì)的引物來(lái)說(shuō),，選擇合適的退火溫度,，是需要慢慢摸索的，一般根據(jù)計(jì)算的退火溫度降低5~10℃來(lái)進(jìn)行首chi擴(kuò)增,，如果出現(xiàn)了目的條帶,，且有雜帶時(shí)，在逐步提高退火溫度,，以提高反應(yīng)的特異性,。

此外，還有反應(yīng)體系,，電泳條件等等因素,。