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PCR是分子生物學的常規(guī)和常用手段,，用途很多，但是都是通過擴增目的基因片段來實現(xiàn)的,。

那么,，首先需要搞明白的是，需要擴增的基因片段大小是多大,，因為不同大小的基因片段其擴增的難度是有差異的,，尤其過長的片段，需要使用不同的taq酶來進行擴增（比如LA taq）,。幾點容易發(fā)生問題的地方供參考：

1.引物,，PCR是基于引物來實現(xiàn)的。引物是否是自己設(shè)計的,？如果是,，需要檢查一下引物設(shè)計的是否合理。如果是從文獻中選取的,，一般出問題的可能性不大,，不放心的可以在數(shù)據(jù)庫比對一下，防止文獻出錯,。

2.模板,，一般來講通過試劑盒提取的DNA質(zhì)量都是可以保證的，也能在4℃冰箱放置較長的時間,，仍能進行PCR擴增,。要是通過煮沸法粗提的DNA就沒辦法放置太長時間了。一句話就是,，模板DNA的濃度要合適,。

3.反應(yīng)條件,，這一塊就比較復雜了，特別是對自己設(shè)計的引物來說,，選擇合適的退火溫度，是需要慢慢摸索的,，一般根據(jù)計算的退火溫度降低5~10℃來進行首chi擴增，如果出現(xiàn)了目的條帶,，且有雜帶時,，在逐步提高退火溫度,，以提高反應(yīng)的特異性,。

此外，還有反應(yīng)體系,，電泳條件等等因素。