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細胞進行爬片流程及注意事項
閱讀：3062 發(fā)布時間：2022-3-1在做免疫熒光（IF）,，激光共聚焦(Confocal),，凋亡檢測（TUNEL）時，免不了要制備細胞爬片,，爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的精準性?，F(xiàn)就如何制備好的細胞爬片介紹。
細胞進行爬片操作流程：
1. 胰酶消化細胞后計數(shù)重懸細胞于*培養(yǎng)基中（懸浮細胞直接離心）,。
2. 加細胞時,，根據(jù)玻片的大小，先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,，目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,，然后放玻片，防止加細胞懸液時玻片漂起,，造成雙層細胞貼片,。整個過程注意無菌操作。
3. 根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可
保存細胞爬片時,，一般用培養(yǎng)皿或避光濕盒,，先在皿底放一層面巾紙，然后再放爬片,，這樣方便做實驗時取片,。然后蓋上蓋子，并在蓋子上做標記,，為避免混淆,。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照沒有問題的,。
細胞進行爬片注意事項：
1. 使用細胞爬片時（比如在六孔板中放入爬片，六孔板的孔底面積往往會比爬片面積多出一部分,，加細胞懸液時常常就是細胞鋪滿整個孔底,，有時細胞生長邊集現(xiàn)象，就是靠近壁邊緣密度要高些,，這樣處于中央玻片上爬的細胞數(shù)量就可能相對較少）,。比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內(nèi)后，加細胞懸液時只滴到玻片上,，一直滴到液體布滿整個玻片又不會溢出玻片邊緣,。
2. 按照實驗設(shè)計，作用一定時間后取玻片,。注意細胞不能太密,，否則容易掉片。