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細(xì)胞進(jìn)行爬片流程及注意事項(xiàng)
閱讀：2880 發(fā)布時(shí)間：2022-3-1在做免疫熒光（IF）,，激光共聚焦(Confocal),，凋亡檢測(cè)（TUNEL）時(shí),，免不了要制備細(xì)胞爬片,，爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。現(xiàn)就如何制備好的細(xì)胞爬片介紹,。
細(xì)胞進(jìn)行爬片操作流程：
1. 胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于*培養(yǎng)基中（懸浮細(xì)胞直接離心）,。
2. 加細(xì)胞時(shí)，根據(jù)玻片的大小,，先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,，目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,，然后放玻片，防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起,，造成雙層細(xì)胞貼片,。整個(gè)過(guò)程注意無(wú)菌操作。
3. 根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可
保存細(xì)胞爬片時(shí),，一般用培養(yǎng)皿或避光濕盒,，先在皿底放一層面巾紙，然后再放爬片,，這樣方便做實(shí)驗(yàn)時(shí)取片,。然后蓋上蓋子，并在蓋子上做標(biāo)記,，為避免混淆,。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照沒(méi)有問(wèn)題的。
細(xì)胞進(jìn)行爬片注意事項(xiàng)：
1. 使用細(xì)胞爬片時(shí)（比如在六孔板中放入爬片,，六孔板的孔底面積往往會(huì)比爬片面積多出一部分,，加細(xì)胞懸液時(shí)常常就是細(xì)胞鋪滿整個(gè)孔底，有時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)邊集現(xiàn)象,，就是靠近壁邊緣密度要高些,，這樣處于中央玻片上爬的細(xì)胞數(shù)量就可能相對(duì)較少）。比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內(nèi)后,，加細(xì)胞懸液時(shí)只滴到玻片上,，一直滴到液體布滿整個(gè)玻片又不會(huì)溢出玻片邊緣。
2. 按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),，作用一定時(shí)間后取玻片,。注意細(xì)胞不能太密，否則容易掉片,。