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1,、標(biāo)本因素
    
血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)留意避免溶血,，紅細(xì)胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色,。

如在冰箱中保留過久,，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深,。本文將敘述板式ELISA各個操縱步驟的留意要點,，珠式、管式及磁性球ELSIA,，國外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用,，嚴(yán)格遵照劃定操縱，必能得出正確的結(jié)果,。

加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,，避免加在孔壁上部，并留意不可濺出,，不可產(chǎn)氣憤泡,。有此測定需用稀的血清,，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣.

2、ELISA加樣步驟
    
在ELISA中一般有3次加樣步聚,，即加標(biāo)本,，加酶結(jié)合物，加底物,。凍結(jié)血清融解后,，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均,，應(yīng)充分混勻宜輕緩,，避免氣泡，可上下倒置混和,，不要在混勻器上強烈振蕩,。

制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固,、血kuai收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液,，再在其加入血清標(biāo)本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。

一般說來,，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,，超過一周測定的需低溫冰存?？捎米鱁LISA測定的標(biāo)本十分廣泛,，體液、分泌物和排泄物等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體 或抗原成份,，elisa試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保留,。
   
3、固相載體
    
ELISA的操縱因固相載體的形成不同而有所差異,，海內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點,。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測標(biāo)本,。

加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時可用定量多道加液器,，使加液過程迅速完成。如有細(xì)菌污染,，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,，以發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣。

良好的儀器和準(zhǔn)確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測結(jié)果正確可靠的必要條件。ELISA頂用的蒸餾 水或去離子水,，包括用于洗滌的,，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定,，有些則需經(jīng)預(yù)處理,。