日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

質(zhì)粒抽提（Plasmid Extraction）方法即去除 RNA,，將質(zhì)粒與細(xì)菌基因組 DNA分開(kāi)，去除蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì),，以得到相對(duì)純凈的質(zhì)粒,。提取質(zhì)粒DNA的方法有很多種，從提取產(chǎn)量上分可分為微量提取,、中量提取,、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取,，從具體操作方法分可以分為堿裂解法,、煮沸法、牙簽法等,，各種不同的方法各有其優(yōu)缺點(diǎn),，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康目梢圆捎煤线m的提取方法。

Ⅰ.使用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒時(shí)請(qǐng)參考具體試劑盒的操作說(shuō)明,。如Omega公司的E.Z.N.A.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin (質(zhì)粒提取盒),。

Ⅱ.堿裂解手提法:此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取,，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴(kuò)增,、銀染序列分析,。方法如下:

1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞于2mlLB培養(yǎng)基,。

2,、37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。

3,、取1.5ml菌體于Ep管(離心管),，以4000rpm離心3min，棄上清液,。

4,、加0.lml溶液I(1%葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0,，25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合,。

5、加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH,，1%SDS),，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5min.

6,、加入0.15m1預(yù)冷溶液III(5mol/LKAc,，pH4.8)，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,，置于冰浴5min.

7,、以10，000rpm離心20min,，取上清液于另一新Ep管

8,、加入等體積的異丙醇，混勻后靜置10min.

9,、以10,，000rpm離心20min，棄上清,。

10,、用70%乙醇0.5ml洗滌一次，抽干所有液體,。

11,、待沉淀干燥后，溶于50ulTE緩沖液中(或60℃溫育去離子水)