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技術(shù)文章

實(shí)驗(yàn)中免疫組化結(jié)果評(píng)判的三種方法

閱讀:6418          發(fā)布時(shí)間:2021-8-11

      免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry)又稱免疫細(xì)胞化學(xué),,是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,,組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原和一抗結(jié)合,,再利用一抗與標(biāo)記生物素的二抗進(jìn)行反應(yīng),前者再用標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素)結(jié)合,,最后通過(guò)呈色反應(yīng)在光學(xué)顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)物,,從而原位確定特定蛋白質(zhì)的分布和含量。免疫組化,,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),,即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素,、酶,、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),,對(duì)其進(jìn)行定位,、定性及相對(duì)定量的研究。想要在做完實(shí)驗(yàn)評(píng)判結(jié)果,,現(xiàn)教您三種方法,,簡(jiǎn)單易學(xué),方便快捷,,一起來(lái)看看吧,!

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(1)陽(yáng)性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法

在40光鏡下,隨機(jī)選擇不重疊的10個(gè)視野,,人工或機(jī)器計(jì)數(shù)陽(yáng)性著色細(xì)胞,,每組3~6張不同動(dòng)物組織切片,然后進(jìn)行組間比較即可,。

(2)灰密度分析法

通過(guò)在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區(qū)域,、相同條件下用image j進(jìn)行灰密度分析,然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析即可,。

(3)評(píng)分法

通過(guò)在光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片分別按染色程度(0~3分為陰性著色,、淡黃色、淺褐色,、深褐色),、陽(yáng)性范圍進(jìn)行評(píng)分(1~4分為0~25%、26~50%,、51~75%,、76~100%),終了時(shí)可以分?jǐn)?shù)相加,,再進(jìn)行比較,。

對(duì)于以上這幾種方法,各有利弊,,請(qǐng)細(xì)心選擇,。要想得到正確結(jié)果的前提是您要做出著色均勻,、背景很淺的高質(zhì)量切片。

   



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