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禽波氏桿菌PCR試劑盒注意事項：

①加入試劑的順序應*,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。

④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。

⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質,。

⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用。

禽波氏桿菌PCR試劑盒原則：

①引物長度： 15-30bp,，常用為20bp左右,。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段,。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜,，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATGC機分布,，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,，避免兩條引物間互補,，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體,，產生非特異的擴增條帶,。

⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基,，應嚴格要求配對,，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點,， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。