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技術(shù)文章

科研抗原的樣品收集及注意事項(xiàng)

閱讀:1700          發(fā)布時(shí)間:2021-4-2

科研抗原樣品收集:

1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測(cè),,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原,無(wú)內(nèi)毒素試管,。

2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,,樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),。避免使用溶血,,高血脂樣品。

3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),,稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,,并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融,。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,,取上清檢測(cè)。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片,。取上清檢測(cè)。

5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測(cè)

6. 樣品應(yīng)清澈透明,,懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,,若不能及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),,避免反復(fù)凍融,。

8. 如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品高值,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況,,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn),,以確定稀釋倍數(shù))。

科研抗原注意事項(xiàng):

①加入試劑的順序應(yīng)*,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。

④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子,。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。

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