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技術(shù)文章

科研抗原的樣品收集及注意事項

閱讀:1950          發(fā)布時間:2021-4-2

科研抗原樣品收集:

1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測,,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,,無內(nèi)毒素試管,。

2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,,樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,,取上清即可檢測,。避免使用溶血,高血脂樣品,。

3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,,并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,,或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,,取上清檢測,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片,。取上清檢測,。

5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測

6. 樣品應(yīng)清澈透明,,懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃,,若不能及時檢測,,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),,或-80℃(6個月內(nèi)檢測),,避免反復(fù)凍融。

8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品高值,,請根據(jù)實際情況,,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù)),。

科研抗原注意事項:

①加入試劑的順序應(yīng)*,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。

⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。

⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。

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