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技術(shù)文章

禽腺病毒PCR試劑盒注意事項方法

閱讀:1564          發(fā)布時間:2021-3-2

禽腺病毒PCR試劑盒樣品的采集:

按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,,長期保存可置-70℃,。但不能超過6個月,標(biāo)本運送應(yīng)采用0℃,。

血清:用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL,,注入無菌的干燥玻璃管,室溫(22-25℃)放置30-60min,,血標(biāo)本可自發(fā)完成凝集析出血清,,或直接使用水平離心機(jī),3000rpm離心5min,,吸取上層血清,,轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。

血漿:用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL,,注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管,,立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次,使抗凝劑與靜脈血充分混勻,,5-10min后即可分離出血漿,轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管,。

拭子,、分泌物等樣品:在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500µL PBS或生理鹽水,劇烈振蕩30s,。棉拭子盡量擠出液體轉(zhuǎn)移到無RNA酶污染的離心管中,,6000rpm離心20s,取上清備用,。

病灶組織樣品:稱取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(置于冰上或加入液氮),,再加1mL生理鹽水研磨至無塊狀物,然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,,8000rpm離心2min,,取上清液于1.5mL滅菌離心管中。

樣品RNA提取
可采購北京百奧萊博科技有限公司的RNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,,并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作,。

禽腺病毒PCR試劑盒注意事項:

(1) 初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作,。

(2) 所有使用的離心管高壓滅菌,,而且必須不含RNA酶。

(3) PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū),、標(biāo)本處理區(qū),、PCR擴(kuò)增區(qū)等),,防止實驗室污染。

(4) 樣本提取,、試劑配置,、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進(jìn)行,以免污染,。

(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,,并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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