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原代細(xì)胞的培養(yǎng)：

原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng),。因此,，較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),，如果是正常細(xì)胞,，仍然保留二倍體數(shù)。但實際上,，通常把第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng),。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。

組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上,，加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng),。

分散細(xì)胞培養(yǎng)大致步驟為:

將動物組織從機(jī)體中取出離散成單個細(xì)胞(常用胰蛋白酶)，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存,、生長和繁殖(注意整個過程無菌)。

原代細(xì)胞操作方法：

（1）取成年新西蘭大白兔,，耳緣靜脈注射空氣處死后,，取下兔子的雙腿，立即用75%乙醇浸泡,。

（2）移入細(xì)胞房內(nèi),，去除雙腿表面的皮毛及肌肉，剪取關(guān)節(jié)段,，移至超菌工作臺內(nèi),。

（3）PBS洗滌數(shù)次，用手術(shù)刀或彎剪將關(guān)節(jié)表面的軟骨組織取下,。

（4）軟骨組織塊靜置5min,，棄去上層液體及懸浮組織，將軟骨組織剪成1mm3的大小,。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,，置入37℃的恒溫?fù)u床中,，振蕩消化15-20min；

（5） 4℃靜置5min,；棄上清,，PBS洗滌，去上清,。加入0.2%膠原酶II,，置入37℃的恒溫?fù)u床中，振蕩消化2H,；
（6）加入生長培養(yǎng)基終止消化,，反復(fù)吹打后依次通過200目濾網(wǎng)。收集濾液,1200rpm離心8min,，棄上清,，用DMEM*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞, 放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

（7）細(xì)胞傳代后放入預(yù)置有薄骨片或蓋玻片的培養(yǎng)板中進(jìn)行培養(yǎng),。細(xì)胞*展開后即可固定做原代鑒定。