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曲霉屬通用PCR試劑盒注意事項(xiàng)與要求
閱讀:1525 發(fā)布時(shí)間:2020-12-9曲霉屬通用PCR試劑盒注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照曲霉屬通用PCR試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子,。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
曲霉屬通用PCR試劑盒樣本處理及要求:
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜,,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,,于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,,或反復(fù)凍融,。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè),。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響*后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。