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技術(shù)文章

白色念珠菌PCR試劑盒操作步驟與注意事項

閱讀:1874          發(fā)布時間:2020-11-18

白色念珠菌PCR試劑盒試驗原理:

白色念珠菌PCR試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測,。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育,。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A,、B,,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系,。

白色念珠菌PCR試劑盒操作步驟:

1. 使用前,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差,。

2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上白色念珠菌PCR試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。

3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時,。

4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。

5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘,。

6. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。

7. 每孔加入底物A,、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘,。避免光照,。

8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。

9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
靈敏度,、檢測范圍,、參考值,具體請查看說明書. 

白色念珠菌PCR試劑盒注意事項:

1.白色念珠菌PCR試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

5.封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存,。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。 

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