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白色念珠菌PCR試劑盒操作步驟夾心法
閱讀:1434 發(fā)布時間:2020-9-23白色念珠菌PCR試劑盒操作方法:
雙抗體夾心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,,4℃ 過夜,。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,下同),。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔),。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃ 孵育0.5~1小時,,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃ 10~30分鐘,。
改良 Frey 氏培養(yǎng)基基礎 澳洲茄胺 ?異硫氫酸兔抗人、大,、小鼠,、兔 β-Amyloid 1-42IgG
改良 Frey 氏培養(yǎng)基基礎添加劑 β-桉葉醇 ?β淀粉樣肽1-42 C端IgG
改良 Frey 氏固體培養(yǎng)基基礎 艾黃素 ?β淀粉樣肽25-35IgG
支原體培養(yǎng)基基礎 D-阿拉伯糖醇 ?β淀粉樣肽31-35IgG
支原體培養(yǎng)基基礎添加劑 阿多尼弗林堿 ?14-3-3蛋白IgG
支原體固體培養(yǎng)基 阿卡波糖 ?磷酸化14-3-3 ζIgG
支原體固體培養(yǎng)基添加劑 安五脂素 ?2,4-二氯苯氧乙酸IgG
營養(yǎng)瓊脂NA 安格洛苷C ?4E結(jié)合蛋白1IgG
馬丁肉湯 阿奇霉素 ?磷酸化4E結(jié)合蛋白1IgG
馬丁肉湯 阿馬堿 ?磷酸化4E結(jié)合蛋白1IgG
馬丁瓊脂 9-氨基喜樹堿 ?磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白IgG
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,,陰性反應為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,以"+",、"-"號表示,。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性,。
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,,4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
4.(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,,洗滌;
6.'后一遍用DDW洗滌,。