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小鼠成纖維細(xì)胞生長因子10elisa檢測試劑盒操作步驟
閱讀:1217 發(fā)布時間:2020-7-29小鼠成纖維細(xì)胞生長因子10elisa檢測試劑盒雙抗體夾心法:
1,、用緩沖液將抗體稀釋至1-1a0ug/ml,。在反應(yīng)孔中加0.1ml,,4℃ 過夜,。次日,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,。
2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,,置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔),。
3,、加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml,。37℃ 孵育0.5~1小時,,洗滌。
4,、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃ 10~30分鐘。
5,、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6,、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”,、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。
小鼠成纖維細(xì)胞生長因子10elisa檢測試劑盒操作步驟:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,;空白孔不加。
4.除空白孔外,,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板),。
6.每孔加入底物A、B各50μL,,37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),,在450nm波長處測定各孔的OD值,。