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間接法(檢測未知抗體)：

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml,， 每孔加0.1ml,，4℃過夜。次日洗滌3次,。

2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)

3,、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml,，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘。

5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6,、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強,，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。

雙抗體夾心法:

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-1a0ug/ml,。在反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 過夜。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次。

2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔),。

3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml,。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌,。

4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。

5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6,、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強,，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性,。