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                               曲霉屬通用PCR試劑盒操作說明

遲來十一月秋風吹。散落一地的記憶,，黃花落葉是寫不盡的詩意,，駐守觀望，那一片空曠的蹈田還有誰在守望,。思念如潮起,，終有潮落時。接下來介紹 曲霉屬通用PCR試劑盒操作說明

以下原則：

①引物長度： 15-30bp,，常用為20bp左右,。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段,。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜,，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATGC機分布,，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,，避免兩條引物間互補,，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體,，產生非特異的擴增條帶,。

⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基,，應嚴格要求配對,，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗,。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點,， 這對酶切分析或分子克隆很有好處,。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol,，以低引物量產生所需要的結果為好,，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,，且可增加引物之間形成二聚體的機會,。