小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)酶聯(lián)免疫試劑盒說明

 

 

 

 

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小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)酶聯(lián)免疫試劑盒說明

操作方法：

 

1. 細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

2. 細胞：用PBS反復(fù)洗滌細胞3次,，調(diào)整細胞濃度達到104

-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融,，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測,。

3. 血清：在室溫下,，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測,。

4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘,，收集上

清。

5. 體液：包括胸腹水,、腦脊液,，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。

6. 組織標本：切取組織標本,，稱取重量0.5mg,，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標本勻漿,，以2000-3000

rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測,。

7. 樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測,，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

 

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3,。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘,。

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。