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                               上海撫生兔ELISA試劑盒操作及保存方法

 

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樣品收集、處理及保存：

 

　　1,、細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。

 

　　2,、細胞：用PBS反復(fù)洗滌細胞3次,，調(diào)整細胞濃度達到104

 

　　-106/ml 左右,，通過反復(fù)凍融，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,，或者細胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測。

 

　　3,、血清：在室溫下,，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測,。

 

　　4、血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘，收集上

 

　　清,。

 

　　5,、體液：包括胸腹水、腦脊液,，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

 

　　6、組織標本：切取組織標本,，稱取重量0,、5mg，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000

 

　　rmp離心20 分鐘,，收集上清進行檢測,。

 

　　7、樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

 

　　8、保存：如果樣品不能立即檢測,，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

 

　　兔ELISA試劑盒操作步驟：

 

　　1,、標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

 

　　2,、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

 

　　3,、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

 

　　4,、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。

 

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。

 

　　6,、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

 

　　7,、溫育：操作同3。

 

　　8,、洗滌：操作同5,。

 

　　9,、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘。

 

　　10,、終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

 

　　11,、測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值），測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。