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                                               大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)要求及注意事項(xiàng)

【操作步驟】

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,，依次進(jìn)行稀釋數(shù)倍。

加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

配液：將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

溫育：操作同3,。

洗滌：操作同5。

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行,。

 

【注意事項(xiàng)】

1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2,、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3,、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔一孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

5、封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6,、底物請(qǐng)避光保存。

7,、嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8、所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9、本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。