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細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項

1. 細(xì)胞收到后建議在培養(yǎng)箱穩(wěn)定4小時左右再依據(jù)細(xì)胞密度,，換液培養(yǎng)或傳代,。

2. 如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),，請將懸浮的細(xì)胞及時離心,，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶中繼續(xù)培養(yǎng)3天,；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,，培養(yǎng)2-3天。若3天后細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請及時聯(lián)系實(shí)驗室,，技術(shù)人員會跟進(jìn)解決,。

3. 貼壁細(xì)胞生長緩慢：適當(dāng)提高血清濃度（高不超過20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長密度,，考慮胰酶消化后,，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

4. 生長不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)生長不均,，成島狀生長,，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散細(xì)胞,，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),。

 

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作）

1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,，加2~3 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化時間,，通常控制在1~2min）,。

2. 鏡下觀察消化情況,，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁運(yùn)動時（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让?，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層,，盡量把細(xì)胞層吹落,、吹散。

3. 取出部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 注意培養(yǎng)基PH值變化情況,，定期換液,，待細(xì)胞密度達(dá)到70-80%時重復(fù)傳代操作或者凍存。