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血液中微量元素分析:三重四極桿電感耦合等離子體質(zhì)譜法的應(yīng)用
人體是由多種元素構(gòu)成的,,根據(jù)元素在體內(nèi)含量的不同,,可將體內(nèi)元素分為常量元素和微量元素,;前者占體重的99.9%,,包括碳,、氫、氧,、磷,、硫、鈣,、鉀,、鎂、鈉,、氯等10余種,,它們構(gòu)成機(jī)體組織,并在體內(nèi)起電解質(zhì)作用,;后者占體重的0.05%左右,,包括鐵、銅,、鋅,、鉻、鈷,、錳,、鎳、錫,、硅,、硒、鉬,、碘,、氟、釩等14余種,。微量元素在體內(nèi)雖然含量較低,,但卻起到重要的生理作用。
在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中,,血液中微量元素含量可做為人體健康狀況的判斷依據(jù),,并對(duì)元素急性或慢性中毒的后續(xù)治療方案提供參考。
發(fā)展?fàn)顩r
傳統(tǒng)的血液微量元素檢測(cè)方法采用電化學(xué)法和原子吸收法,,由于其單元素檢測(cè)特點(diǎn)使其無法具備高通量檢測(cè)的特性,;同時(shí)前處理繁瑣,儀器設(shè)備易受環(huán)境影響,導(dǎo)致結(jié)果準(zhǔn)確性和重復(fù)性差,。
電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)具有重現(xiàn)性好,、檢出限低、自動(dòng)化程度高,、線性范圍寬等特點(diǎn),,且前處理無需消解、操作快捷,、檢測(cè)通量高,,現(xiàn)已成為主流檢測(cè)手段。近幾年一系列標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布表明電感耦合等離子體質(zhì)譜多元素檢測(cè)能力和高通量等優(yōu)勢(shì)逐漸被認(rèn)可,,并已在血液元素分析中起到重要作用,。
電感耦合等離子體串接質(zhì)譜的優(yōu)勢(shì)
血液樣品中含有大量Cl+,氬氣作為等離子氣體,,離子源中40Ar+與35Cl+結(jié)合會(huì)形成大量40Ar35Cl+,。砷在自然界中存在的穩(wěn)定同位素僅為75As,為了消除40Ar35Cl+的干擾,,可以選擇基于動(dòng)能歧視的碰撞模式,,并通過增加碰撞氣流量消除大部分40Ar35Cl,然而會(huì)極大降低靈敏度,。在ICP-QMS反應(yīng)模式中(如圖1),,通常在碰撞反應(yīng)池加入氧氣生成75As16O+進(jìn)行檢測(cè),而鋯離子的質(zhì)量數(shù)同為91,,依舊會(huì)對(duì)75As16O+造成干擾引起假陽(yáng)性,。
在ICP-TQMS氧氣質(zhì)量轉(zhuǎn)移模式下(如圖2),Q1僅讓質(zhì)量數(shù)為75的離子通過,,As+可以順利進(jìn)入,,Zr+則被拒之門外。通過Q2碰撞反應(yīng)池進(jìn)行氧反應(yīng)質(zhì)量轉(zhuǎn)移,,然后Q3的質(zhì)量數(shù)設(shè)定為91,,此時(shí)到達(dá)檢測(cè)器的離子則為75As16O+,即可實(shí)現(xiàn)砷的準(zhǔn)確定量分析,。
實(shí)驗(yàn)部分
1,、實(shí)驗(yàn)儀器
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型號(hào):EXPEC 7350型 ICP-MS/MS
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配置:標(biāo)準(zhǔn)石英進(jìn)樣系統(tǒng)
2、試劑及標(biāo)準(zhǔn)品
試劑:Triton X-100,、優(yōu)級(jí)純硝酸,、優(yōu)級(jí)純異丙醇、超純水(電阻率≥18.2 MΩ?cm,,25℃)
標(biāo)準(zhǔn)溶液:多元素混標(biāo)溶液(1000 μg/mL,,國(guó)家有色金屬研究院)、多元素內(nèi)標(biāo)溶液
3,、樣品處理與標(biāo)準(zhǔn)曲線配制
樣品處理:
1,、配制血液樣品稀釋劑:0.5%硝酸+0.01%曲拉通+2%異丙醇,取5 mL硝酸,、0.1 mL曲拉通和20 mL異丙醇,,用超純水稀釋混勻定容到1000 mL。
2,、血液樣本前處理:取0.5 mL血液用稀釋劑稀釋至10 mL,,上下?lián)u晃均勻后渦旋10分鐘,5000 r/min離心10分鐘,,取上清液進(jìn)樣測(cè)試,。(注意:血液取樣前須盡量搖晃均勻)
標(biāo)準(zhǔn)曲線:
分別精密量取Ca、Mg,、Fe,、As、Cu,、Mn,、Pb、Se,、Zn單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制混標(biāo),,稀釋得到的標(biāo)準(zhǔn)溶液,濃度梯度見下表:
4,、標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限
在表2所示的濃度范圍內(nèi),,所有待測(cè)元素線性相關(guān)系數(shù)值均大于0.999。將全程序樣品空白連續(xù)分析11次,,所得結(jié)果以3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差稀釋倍數(shù)計(jì)算各元素檢出限,,詳見表3。
5,、實(shí)驗(yàn)結(jié)論
此方法采用三重四極桿電感耦合等離子質(zhì)譜儀(ICP-MS/MS)對(duì)血液樣本中的9種元素進(jìn)行了分析,。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,所建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性系數(shù)均大于0.999,,樣品平行性較好,;加標(biāo)回收率良好均在88.41%~112.90%之間。
上述測(cè)試結(jié)果證明,,對(duì)于血液這種具有復(fù)雜基體的生物樣品,,原位質(zhì)量模式和氧反應(yīng)質(zhì)量轉(zhuǎn)移模式可徹底消除基體干擾,保持較高的靈敏度,、穩(wěn)定性,、準(zhǔn)確度和精密度,。綜上,使用ICP-MS/MS通過該方法可以快速精準(zhǔn)地完成血液中多種元素的同時(shí)測(cè)定,。