冷凍干燥機如何對菌種進行保藏

江蘇恒敏儀器冷凍干燥機主要部件分為干燥箱,、凝結器、冷凍機組,、真空泵,、加熱/冷卻裝置等。凍干機起源于19世紀20年代的真空冷凍干燥技術,，后真空凍干技術除了在醫(yī)藥上有著廣泛應用,，在生物制品、食品,、血液制品,、活性物質領域之外的領域也發(fā)揮了重要作用。下面小編為大家介紹下微生物菌種的冷凍干燥保藏操作流程：
 凍干機適用于大多數(shù)細菌,、放線菌,、病毒、噬菌體,、立克次體,、霉菌和酵母等的真空冷凍干燥保藏，但不適于霉菌的菌絲型,、菇類,、藻類和原蟲等。其操作流程如下：
 1,、安瓿管準備
 安瓿管材料以中性玻璃為宜,。清洗安瓿管時，先用2%鹽酸浸泡過夜,，自來水沖洗干凈后,，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后,、貼上標簽，標上菌號及時間，加入脫脂棉塞后,，121℃下高壓滅菌15-20分鐘,，備用。
 2,、保護劑的選擇和準備
 保護劑種類要根據(jù)微生物類別選擇,。配制保護劑時，應注意其濃度及pH值,，以及滅菌方法,。如血清，可用過濾滅菌,；牛奶要先脫脂,，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次,，每次10-30分鐘,，備用。
 3,、凍干樣品的準備
 在適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,，進行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術規(guī)程》(試行))，與保護劑混合均勻,，分裝,。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜(以大腸桿菌為例，為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升,，只需10毫升瓊脂斜面兩支),。采用較長的毛細滴管，直接滴入安瓿管底部,，注意不要濺污上部管壁,，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管,，裝量為半個球部,。若是液體培養(yǎng)的微生物，應離心去除培養(yǎng)基,，然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻,，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短,，在1-2小時內分裝完畢并預凍,。分裝時應注意在無菌條件下操作。
 4,、預凍
 一般預凍2小時以上,，溫度達到-20℃到-35℃左右,。
 5、冷凍干燥
 采用凍干機進行冷凍干燥,。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內,，開始冷凍干燥，時間一般為8-20小時,。
 終止干燥時間應根據(jù)下列情況判斷：
 安瓿管內凍干物呈酥塊狀或松散片狀,；
 真空度接近空載時的zui高值；
 樣品溫度與管外溫度接近,；
 選用1-2支對照管,，其水份與菌懸液同量，視為干燥完結,；
 選用一個安瓿管,，裝1-2%氯化鈷，如變深蘭色,，可視為干燥完結,；
 冷凍干燥完畢后，取出樣品安瓿管置于干燥器內,，備用,。
 6、真空封口及真空檢驗
 將安瓿管頸部用強火焰拉細,，然后采用真空泵抽真空,，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度,。
 7,、保藏
 安瓿管應低溫避光保藏。
 8,、質量檢查
 冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查,，如存活率、生產能力,、形態(tài)變異,、雜菌污染等。新版GMP附錄1第三章第十一條規(guī)定應當對各個潔凈級別的微生物進行動態(tài)監(jiān)測,，以評估無菌生產的微生物狀況,。其中監(jiān)測方法包含沉降菌法、定量空氣浮游菌采樣法和表面取樣法等,。與此同時,，新版GMP更強調在關鍵操作的全過程均應該對*潔凈區(qū)進行懸浮粒子和微生物監(jiān)測。使灌裝與凍干區(qū)域相連接的半自動進出料裝載機構以L型布局形式出現(xiàn),，與以往的老式凍干機的大開門式相比較,，因良好的隔離操作,，環(huán)境控制更趨向于理性的數(shù)據(jù)控制，且無菌控制的可信度大大增加,，L型布局的合理設計使*區(qū)域更集中,，在環(huán)境監(jiān)測時，監(jiān)測點也更容易把握,，便于實施。