二氧化碳培養(yǎng)箱水托盤加硫酸銅方法

  配制方法：20g無水硫酸銅＋5ml濃硫酸＋1L高壓過的雙蒸水

  配制飽和硫酸銅溶液 

 細胞間*消毒

       1．熏蒸無菌間,，甲醛加高錳酸鉀即可,，一般72小時后開門通氣,。

       2．用0.5%新潔爾滅擦拭超凈臺和墻壁,，確保不留死角,，地面用新潔爾滅消毒液拖地,。

       3．75%酒精對無菌間的所有物品進行消毒，包括孵箱內,。

       4．紫外燈,，空氣凈化器打開至少4h以上，紫外燈可以過夜,。

       目前,，控制水盤內污染的方法有如下幾種：

       1、 定期(至少每兩周一次),，更換水盤內的無菌蒸餾水或無菌去離子水,。

       2、 在水盤內添加適量硫酸銅,，配制方法：20g無水硫酸銅＋5ml濃硫酸＋1L滅菌純水,。

       3、 夏季氣溫高時,，水盤里加0.02％的疊氮鈉可以有效的預防真菌污染,。

       4、 水盤內添加適量抗生素,。

       5,、 定期為二氧化碳培養(yǎng)箱（含水盤）進行一次高溫滅菌。

       對付霉菌通常用飽和的硫酸銅溶液,，放在培養(yǎng)箱的裝水盤中,，細胞房的空調要用除濕的功能。如果不幸染上,，要用84液擦培養(yǎng)箱,，再用75%酒精擦,。

 滅菌操作：

 在無菌箱內每立方米用甲醛8—10毫升，高錳酸鉀5克,，熏蒸45分鐘后接種

 在無菌箱中每立方米用甲醛8－10毫升,、高錳酸鉀0.25千克，熏蒸45分鐘后接種,，栽培種接種量按每瓶二級種接30－40袋為宜,。

 （一）常用消毒劑

       現(xiàn)將常用的藥品及其配制、使用方法,，介紹如下：

    1． 35％甲醛水溶液（HCHO）：又名福爾馬林,，使蛋白質變性。用于培養(yǎng)室,、無菌室的滅菌,。

 　2．0.1％的升泵水（HgCL3）：能使蛋白質變性，抑制酶類,。0.1％升泵配制方法是稱取升泵0.1克,，    用少許酒精溶解，再加水至100毫升即成,。用于無菌箱,、二氧化碳培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿四周表面以及手指的滅菌,。

　3．石炭酸（C6H5OH）,，5％濃度噴霧后，能使蛋白變性沉淀,。石炭酸（苯酚）50毫升,，加水950毫升配成。用于 工作服,、實驗桌的滅菌,。殺菌效果同升泵。

4．高錳酸鉀（KMnO4）：氧化劑,。0.1％濃度能使蛋白質與氨基酸氧化,，失去酶的活性，用于消毒,，能抑制或殺死 雜菌,。

　5．乙醇（CH3CH3OH）：又稱酒精。消毒以75％濃度的效果好,。它能使蛋白質脫水變性,。高濃度酒精會使蛋白質很快脫水凝固，消毒作用反而減弱,。

　 6．新潔爾滅：0.25％新潔爾滅用于無菌箱,、無菌室的滅菌。一般新潔爾滅5％原液50毫升,；加水950毫升配成,。

　7．漂白粉水：取漂白粉10克，加水140毫升配成,。通常在使用前臨時配制,，靜置1～2小時，取上清液噴射,，進 行室內消毒,，每平方米用1升。

　8．藥皂：煤酚皂,、硼酸皂等各種藥皂的水溶液,，均可用于器具、橡皮塞及手指的消毒,。

 9．2％硫酸銅溶液：用硫酸銅（膽礬）2克,，加水至 100毫升加熱溶解配成。用于床架,、木架等各種菌種架的消 毒,。還可用5％硫酸銅溶液。

10．0.5％波爾多液：先用硫酸銅1斤,，溶于100斤水,， 再用石灰1斤，加水100斤,。然后等量混合起來即成,。用于菌種架、段木的消毒,。

 11.多菌靈：用于殺滅真菌,、半知茵。1：800倍拌料或 1：500倍噴灑均可,。

       （二）無菌箱及無菌室的消毒滅菌

       無菌箱的消毒滅菌,，可采取以下幾種方法：

       1．用甲醛和高錳酸鉀混合熏蒸：一般每平方米需40％甲醛10毫升、高錳酸鉀8毫升,，進行熏蒸,。使用時，先密閉門窗,，量甲醛溶液盛入容器中,、然后倒入量好的高錳酸鉀，人員隨之離開接種室,，關緊房門,，熏蒸20—30分鐘即可,。

       2．0.1％升泵水消毒：用0.1％升泵水浸過的紗布或海綿進行指擦，或用噴霧器噴霧滅菌,，使箱內的上下左右都沾上升泵水,，手也可用升泵水消毒，并把袖子卷起來,。噴霧后 20～30分鐘,，箱內的雜菌和霧滴一起落到箱底被殺死，內部的空氣就變得很清潔,。

　　 3．紫外線照射滅菌：在無菌箱中裝一支200伏,、3O瓦的紫外線燈管；每次開20～30分鐘,，就能達到空間殺菌的 目的,。照射結束后，罩黑布半小時,，以增強殺菌效果,。

　　 4．石炭酸噴霧：在每次接種之前，用5％石炭酸溶液噴霧,，可促使空氣中的微粒和雜菌沉降,，防止桌面微塵飛揚，并有殺菌作用,。

　　 5．石灰揩擦：經(jīng)常用藥物熏蒸,，易造成酸性環(huán)境，特別用甲醛和高錳酸鉀熏蒸長久,，污染往往越來越嚴重,，預防辦法可把各種藥品交替使用，過一段時間（約五周）用石灰擦洗一遍,。實踐證明,，這樣做效果很好。

 無菌室消毒同無菌箱,。

      三）無菌室的使用規(guī)程

　　 無菌室無固定程序,，但按一般操作應遵循如下規(guī)程：

　   1．接種室內和緩沖室內使用前，用5％石炭酸溶液噴霧,。把所需要的器材搬入緩沖室清洗,，等曬干后搬入接種 室，打開紫外線燈,，照射殺菌,。

　　2．穿上工作服及無菌工作帽、鞋，然后用煤皂液洗手2 分鐘,。進人接種室后,，查驗器械是否放在一定位置。然后用 5％石炭酸溶液重點在工作臺的上方和附近的地面上噴霧,。然后退回緩沖室,。還可給接種室門口地面灑一層石灰，進門時踩石灰可使鞋底保持無雜菌狀態(tài),。

　    3．接種操作前，用70％的酒精棉球擦手,。進行無菌操作時,，要嚴格認真，動作輕捷,，盡量減少空氣流動,。

　　 4．工作結束后，立即將臺面收拾干凈,，不留殘物,。然后用5％石炭酸全面噴灑。

　　5．操作時,，注意安全,。如棉塞著火，用手緊握即可熄滅,。如打破菌瓶,，可用抹布沾5％石炭酸，收拾到廢物桶 內,。每次的污染物應小心放在盤內,，蓋嚴拿出室外深埋或燒掉。

　?。ㄋ模o菌室空氣污染情況的檢驗

　　 定期檢驗無菌室空氣污染情況,，對改進滅菌措施，提高成品率是非常必要的,。常用方法步驟如下：

　　 1．平板檢驗法：用常規(guī)培養(yǎng)基,，倒成平板，收入接種室,。在事先熏蒸好的接種室,，使用前半小時或1小時把供試的培養(yǎng)皿或試管打開，按預定時間蓋好培養(yǎng)皿或試管,。留對照皿不打開,。然后一起放入30℃的溫箱中培養(yǎng)48小時，檢查有無菌殖生長，并由菌落形態(tài),，判斷雜菌種類,。一般要求平板培養(yǎng)基開蓋5分鐘，菌落不超過3個,；敘面培養(yǎng)基開塞 30分鐘者,，以不出現(xiàn)菌落為合格。

　　 2．斜面檢驗法：將常用的瓊脂斜面培養(yǎng)基各取二管,， 放入接種室,，按無菌操作各將其中的一管的棉塞取出，放在滅菌的培養(yǎng)皿內,。經(jīng)過一定時間后,，再將棉塞通過火焰，塞回試管,，連同對照一起培養(yǎng),。經(jīng)48小時后，檢驗無雜菌生長,。和上邊方法同,。

　　 3．空氣污染情況檢驗：在接種過程中，人員的出過,、器材的搬放,、接種操作的動作等原因造成空氣污染，檢驗方法是在準備工作結束后,，接種操作開始時,，按上述方法打開培養(yǎng)皿蓋子或試管塞，經(jīng)5分鐘,、30分鐘或直到工作結束時再蓋好,，以檢驗在不同的使用時間內，空氣污染的程度,。

　　 如霉菌較多時,；可先用5％石炭酸全面噴射后，再用甲醛熏蒸,。如細菌較多時,，可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的辦法加以殺滅。