公司動(dòng)態(tài)
如何有效的開(kāi)展動(dòng)物睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?/h3>
閱讀:2438 發(fā)布時(shí)間:2019-2-15
雖然早已知道睡眠在人類(lèi)及哺乳動(dòng)物的生命活動(dòng)中具有十分重要的生理意義,,但迄今為止睡眠發(fā)生的確切機(jī)制卻尚未*闡明。根據(jù)睡眠時(shí)的腦電圖,、肌電圖及眼球運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)可將睡眠分為非快速眼球運(yùn)動(dòng)睡眠和快速眼球運(yùn)動(dòng)睡眠或快波睡眠,。 睡眠剝奪是研究睡眠的功能與發(fā)生機(jī)制的重要方法。睡眠剝奪模型的選擇將直接影響睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)的可靠性及準(zhǔn)確性對(duì)睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有重要的影響?,F(xiàn)將幾種常用的睡眠剝奪模型的方法評(píng)價(jià)及進(jìn)展情況綜述如下,。
1.平臺(tái)睡眠剝奪技術(shù)
此類(lèi)方法主要是利用大鼠畏水及在水中無(wú)法進(jìn)入睡眠的生活習(xí)性,通過(guò)在盛水的水槽中放置平臺(tái),讓大鼠站立在平臺(tái)上,,因平臺(tái)直徑足夠小(直徑 6.5 cm 或更小)當(dāng)大鼠進(jìn)入 REM 時(shí),,因全身肌張力降低引起節(jié)律性低頭觸水以此來(lái)達(dá)到剝奪 REM 的目的, 此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行無(wú)需復(fù)雜昂貴的設(shè)備,,在不同條件的實(shí)驗(yàn)室均能開(kāi)展因而應(yīng)用廣泛 其主要用來(lái)剝奪大鼠的REM ,,可分為以下三種方法:
1.1單平臺(tái)睡眠剝奪法
此方法早于 1964 年被應(yīng)用在貓的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中,不久以后有人將此方法應(yīng)用于大鼠的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn),,,方法為將一圓柱形小平臺(tái) (直徑約 65 m m )放置在長(zhǎng) 400 mm寬340 m m高160 mm的水槽中,,往水槽中加水至平臺(tái)露出水面約 10 mm ,,將 1 只大鼠置于小平臺(tái)上,大鼠可在平臺(tái)上站立,,可進(jìn)入 NREM,,當(dāng)大鼠進(jìn)入 REM 時(shí)全身骨骼肌張力明顯降低,頸部肌張力降低引起節(jié)律性低頭觸水從而無(wú)法進(jìn)入 REM,,采用 SP 實(shí)驗(yàn)可引起動(dòng)物的體重及胸腺重量減輕,,腎上腺重量增加,血漿中腎上腺皮質(zhì)酮增加,,動(dòng)物攻擊行為增加,,機(jī)體免疫反應(yīng)抑制等。
因 SP 是單只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)且在實(shí)驗(yàn)中大鼠的活動(dòng)空間受限,,故有學(xué)者認(rèn)為以上的臨床與實(shí)驗(yàn)室表現(xiàn)可能與大鼠的群體隔離或活動(dòng)空間受限有關(guān),,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)前群體飼養(yǎng)的動(dòng)物當(dāng)與群體隔離后也會(huì)出現(xiàn)攻擊行為增加,,血漿中 CORT 增加,,免疫功能抑制等表現(xiàn)。大鼠活動(dòng)空間受限也可引起血漿中 CORT 的水平的增加,,這些結(jié)果與單平臺(tái)睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中見(jiàn)到的類(lèi)似,,為克服SP 中大鼠與群體分離及活動(dòng)空間受限的缺點(diǎn),在 SP 基礎(chǔ)上進(jìn)一步發(fā)展為多平臺(tái)睡眠剝奪法,。
1.2多平臺(tái)睡眠剝奪法
M P法于1981年應(yīng)用在大鼠睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中,,在 M P中為擴(kuò)展大鼠的活動(dòng)空間將小平臺(tái)由 SP 中的 1 個(gè)增加至 7 個(gè),仍將1只大鼠放在小平臺(tái)間進(jìn)行睡眠剝奪試驗(yàn),,因大鼠可以在 7個(gè)小平臺(tái)間自由活動(dòng),,故活動(dòng)范圍較 SP 中有明顯增大。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較,,在M P中反映應(yīng)激增強(qiáng)的一些指標(biāo),,如腎上腺重量增加和胸腺重量減少仍然存在,甚至在大鼠血液中 ACTH %CORT 的增加及腎上腺重量的增加較SP的更高,提示 M P較SP有更強(qiáng)的應(yīng)激性!考慮到大鼠為群居動(dòng)物,,單只大鼠實(shí)驗(yàn)易導(dǎo)致與所在群體的隔離,。為克服群體隔離所帶來(lái)的應(yīng)激反應(yīng),有學(xué)者將 M P 法進(jìn)一步改良發(fā)展為改良多平臺(tái)睡眠剝奪法!
1.3改良多平臺(tái)睡眠剝奪法
在MMPM 中將 10 只大鼠(具體數(shù)目可根據(jù)實(shí)際需要確定)同時(shí)放在裝有 14 或 15 個(gè)小平臺(tái)的水槽中(長(zhǎng) 127 cm ,,寬 44 cm ,,高 45 cm )進(jìn)行實(shí)驗(yàn),這樣既避免了 SP及M P中單只大鼠與群體隔離的缺點(diǎn),,又保留了 M P 中活動(dòng)范圍增大的特點(diǎn),,因在實(shí)驗(yàn)時(shí)大鼠多是 3 只或 4 只一籠進(jìn)行飼養(yǎng),如 1 組實(shí)驗(yàn)需 10 只大鼠,,則需要3籠或 4籠大鼠,,考慮到來(lái)自不同籠的大鼠放在一起實(shí)驗(yàn)也可能造成群體的不穩(wěn)定,有學(xué)者將實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)一步改良,,將實(shí)驗(yàn)所需的 10 只大鼠放在同一只籠中飼養(yǎng) 2 周,,實(shí)驗(yàn)時(shí)再將這些大鼠放在一起同時(shí)進(jìn)行睡眠剝奪實(shí)驗(yàn),這樣以克服實(shí)驗(yàn)時(shí)大鼠群體不穩(wěn)定的缺點(diǎn),,從而將實(shí)驗(yàn)時(shí)的不確定因素減至低! 實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)在MMPM中"經(jīng)采取措施保持大鼠群體穩(wěn)定性及避免大鼠與群體分離后" 大鼠腎上腺重量%體重減輕量%血清中促腎上腺皮質(zhì)激素(A CTH )和腎上腺皮質(zhì)酮 (CO RT) 的含量均較M P中為低,,提示M M PM 較 M P 具有更低的應(yīng)激性,是較為理想的REM 剝奪方法,。
2強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)睡眠剝奪法
此類(lèi)睡眠剝奪方法形式多樣,,在腦電監(jiān)護(hù)情況下可行全部的睡眠剝奪和選擇性的睡眠剝奪。其共同特點(diǎn)是通過(guò)動(dòng)力裝置迫使大鼠不停地運(yùn)動(dòng),,從而達(dá)到睡眠剝奪的目的,。此類(lèi)方法的優(yōu)點(diǎn)是睡眠剝奪效果明顯,睡眠剝奪的時(shí)間及強(qiáng)度易于掌握,,重復(fù)性好,,無(wú)須實(shí)驗(yàn)人員隨時(shí)觀察實(shí)驗(yàn)情況,減輕了實(shí)驗(yàn)人員工作強(qiáng)度,。缺點(diǎn)是長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)引起機(jī)體的一系列應(yīng)激反應(yīng)可能干擾睡眠剝奪的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,現(xiàn)選取其中兩種有代表意義的方法介紹如下
2.1水平轉(zhuǎn)盤(pán)睡眠剝奪法
此方法應(yīng)用廣泛,于 1983 年應(yīng)用在睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中,,實(shí)驗(yàn)裝置由一個(gè)電腦控制臺(tái),、一個(gè)水平轉(zhuǎn)盤(pán)及兩個(gè)開(kāi)放的長(zhǎng)方形有機(jī)玻璃缸組成,轉(zhuǎn)盤(pán)直徑為 46 cm,,在電腦控制下可以按順時(shí)針逆時(shí)針?lè)较螂S機(jī)水平轉(zhuǎn)動(dòng)! 兩只有機(jī)玻璃缸的尺寸均為長(zhǎng)60 cm ,,寬20.5 cm,高 60 cm ,。在距離缸底 5 cm 處的缸側(cè)壁開(kāi)有一條縫隙,,使轉(zhuǎn)盤(pán)的一半能分別從縫隙伸入兩只玻璃缸中并能隨意轉(zhuǎn)動(dòng),。缸底留置水約 2 cm 深,轉(zhuǎn)盤(pán)離水面約3 cm 實(shí)驗(yàn)前1周將睡眠剝奪大鼠頭頸部植入微電極" 并將微電極與電腦控制臺(tái)相連,,將大鼠放在轉(zhuǎn)盤(pán)上適應(yīng)環(huán)境1周,,每天約1 h讓大鼠習(xí)慣在轉(zhuǎn)盤(pán)上活動(dòng),進(jìn)水,,進(jìn)食等,。實(shí)驗(yàn)時(shí)將實(shí)驗(yàn)組的大鼠及對(duì)照組的大鼠分別置于兩只缸中的轉(zhuǎn)盤(pán)上,當(dāng)電腦通過(guò)微電極監(jiān)測(cè)到實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)入慢波或快波睡眠的腦電信號(hào)后,,立即發(fā)出指令使轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)動(dòng) 6 s(6 s內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng) 1/3 圈),,當(dāng)大鼠被轉(zhuǎn)到玻璃缸壁時(shí),因被玻璃缸壁擋住而可能掉入水中,,每次在實(shí)驗(yàn)組睡眠剝奪大鼠進(jìn)入睡眠時(shí)轉(zhuǎn)盤(pán)即轉(zhuǎn)動(dòng) 6 s,,方向隨機(jī),轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)兩只大鼠均被動(dòng)地隨著轉(zhuǎn)盤(pán)移動(dòng),。此方法一次只剝奪一只大鼠睡眠,當(dāng)實(shí)驗(yàn)組的睡眠剝奪大鼠在活動(dòng),、進(jìn)水,、進(jìn)食時(shí)轉(zhuǎn)盤(pán)并不轉(zhuǎn)動(dòng)而此時(shí)對(duì)照組的大鼠則可趁機(jī)睡覺(jué)以彌補(bǔ)被剝奪的睡眠。此方法中睡眠剝奪組大鼠與對(duì)照組大鼠條件極其相似,,因而可減少因?qū)嶒?yàn)條件不同而所致的應(yīng)激反應(yīng),。
2.2旋轉(zhuǎn)圓筒睡眠剝奪法
此方法于 1979 年應(yīng)用于睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中,設(shè)備主要由一柱形圓筒及一小型慢速馬達(dá)構(gòu)成,。圓筒直徑 30 cm,,高 30 cm 。圓筒底由 PVC (聚氯乙烯)構(gòu)成,,側(cè)壁由直徑為 10.4 m m 的 PVC 桿圍成,。桿長(zhǎng)度 30 cm,桿之間間隔 15.5 m m,,圓筒與小型馬達(dá)相連,。馬達(dá)轉(zhuǎn)速為每 45 s轉(zhuǎn) 1 圈(也有學(xué)者應(yīng)用每 m in 轉(zhuǎn) 1 圈)。至少在實(shí)驗(yàn)前 2 d每天將大鼠放入圓筒中適應(yīng)環(huán)境 1 次,,適應(yīng)時(shí)間不少于 3 h,。實(shí)驗(yàn)時(shí)將馬達(dá)按 45 s每1 圈進(jìn)行勻速轉(zhuǎn)動(dòng),通過(guò)圓筒的轉(zhuǎn)動(dòng)帶動(dòng)大鼠不停運(yùn)動(dòng)而達(dá)到睡眠剝奪的目的,。此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行,,睡眠剝奪效果明顯。缺點(diǎn)是長(zhǎng)時(shí)間不停運(yùn)動(dòng)可引起機(jī)體的運(yùn)動(dòng)后應(yīng)激反應(yīng)及身體疲勞,,可能干擾睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)結(jié)果! 此類(lèi)方法發(fā)展出多種變化,,有實(shí)驗(yàn)者在進(jìn)行新生大鼠睡眠剝奪時(shí)將筒旋轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)至 2~3 r/m in后期逐漸增加至 6~7 r/m in,。
3輕柔刺激法
此方法在短期的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多,當(dāng)實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)觀察大鼠行為或通過(guò)腦電波監(jiān)護(hù)觀察到大鼠進(jìn)入睡眠時(shí),,通過(guò)輕輕拍打大鼠籠子或應(yīng)用聲音,、光線(xiàn)的刺激促使大鼠保持清醒,必要時(shí)還可用紙卷,、鉛筆或用手直接觸摸大鼠使大鼠無(wú)法進(jìn)入睡眠,。注意不能將大鼠移出籠外!此方法簡(jiǎn)單易行,在腦電監(jiān)護(hù)情況下可進(jìn)行 TSD 或 SSD 實(shí)驗(yàn),,在無(wú)腦電監(jiān)護(hù)時(shí)需要實(shí)驗(yàn)人員在旁不間斷觀察大鼠行為,,故較適合行短時(shí)間的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)。
4藥物睡眠剝奪法
定時(shí)給大鼠注射藥物,, 此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行,,操作方便,不需要特殊儀器,。缺點(diǎn)是大鼠存在個(gè)體差異,, 睡眠剝奪的效果及程度及不易掌握。多用在研究某些特殊藥物藥理作用的實(shí)驗(yàn)中,。
5. 剝奪桿睡眠剝奪法(型號(hào):XR-XS107)
在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室籠中采用間隙性的剝奪桿掃描進(jìn)行觸覺(jué)刺激來(lái)干擾自由行為的小鼠,。該方法防止了人類(lèi)接觸和干預(yù)對(duì)睡眠剝奪的影響,并且在整個(gè)睡眠剝奪過(guò)程期間小化身體活動(dòng),。此外,,該程序準(zhǔn)確且可預(yù)測(cè)。實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物從小都是在飼養(yǎng)籠中長(zhǎng)大,,基于實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)籠使得動(dòng)物能夠保持在正常的社會(huì)環(huán)境中實(shí)施了一種相對(duì)無(wú)壓力的方法來(lái)誘導(dǎo)動(dòng)物睡眠剝奪模型,,從而避免了外界環(huán)境及其他因素對(duì)睡眠剝奪的影響。此外,,基于飼養(yǎng)籠式的睡眠剝奪儀易于組裝和清洗,,設(shè)計(jì)更加地人性化。
雖然早已知道睡眠在人類(lèi)及哺乳動(dòng)物的生命活動(dòng)中具有十分重要的生理意義,,但迄今為止睡眠發(fā)生的確切機(jī)制卻尚未*闡明。根據(jù)睡眠時(shí)的腦電圖,、肌電圖及眼球運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)可將睡眠分為非快速眼球運(yùn)動(dòng)睡眠和快速眼球運(yùn)動(dòng)睡眠或快波睡眠,。 睡眠剝奪是研究睡眠的功能與發(fā)生機(jī)制的重要方法。睡眠剝奪模型的選擇將直接影響睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)的可靠性及準(zhǔn)確性對(duì)睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有重要的影響?,F(xiàn)將幾種常用的睡眠剝奪模型的方法評(píng)價(jià)及進(jìn)展情況綜述如下,。
1.平臺(tái)睡眠剝奪技術(shù)
此類(lèi)方法主要是利用大鼠畏水及在水中無(wú)法進(jìn)入睡眠的生活習(xí)性,通過(guò)在盛水的水槽中放置平臺(tái),讓大鼠站立在平臺(tái)上,,因平臺(tái)直徑足夠小(直徑 6.5 cm 或更小)當(dāng)大鼠進(jìn)入 REM 時(shí),,因全身肌張力降低引起節(jié)律性低頭觸水以此來(lái)達(dá)到剝奪 REM 的目的, 此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行無(wú)需復(fù)雜昂貴的設(shè)備,,在不同條件的實(shí)驗(yàn)室均能開(kāi)展因而應(yīng)用廣泛 其主要用來(lái)剝奪大鼠的REM ,,可分為以下三種方法:
1.1單平臺(tái)睡眠剝奪法
此方法早于 1964 年被應(yīng)用在貓的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中,不久以后有人將此方法應(yīng)用于大鼠的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn),,,方法為將一圓柱形小平臺(tái) (直徑約 65 m m )放置在長(zhǎng) 400 mm寬340 m m高160 mm的水槽中,,往水槽中加水至平臺(tái)露出水面約 10 mm ,,將 1 只大鼠置于小平臺(tái)上,大鼠可在平臺(tái)上站立,,可進(jìn)入 NREM,,當(dāng)大鼠進(jìn)入 REM 時(shí)全身骨骼肌張力明顯降低,頸部肌張力降低引起節(jié)律性低頭觸水從而無(wú)法進(jìn)入 REM,,采用 SP 實(shí)驗(yàn)可引起動(dòng)物的體重及胸腺重量減輕,,腎上腺重量增加,血漿中腎上腺皮質(zhì)酮增加,,動(dòng)物攻擊行為增加,,機(jī)體免疫反應(yīng)抑制等。
因 SP 是單只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)且在實(shí)驗(yàn)中大鼠的活動(dòng)空間受限,,故有學(xué)者認(rèn)為以上的臨床與實(shí)驗(yàn)室表現(xiàn)可能與大鼠的群體隔離或活動(dòng)空間受限有關(guān),,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)前群體飼養(yǎng)的動(dòng)物當(dāng)與群體隔離后也會(huì)出現(xiàn)攻擊行為增加,,血漿中 CORT 增加,,免疫功能抑制等表現(xiàn)。大鼠活動(dòng)空間受限也可引起血漿中 CORT 的水平的增加,,這些結(jié)果與單平臺(tái)睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中見(jiàn)到的類(lèi)似,,為克服SP 中大鼠與群體分離及活動(dòng)空間受限的缺點(diǎn),在 SP 基礎(chǔ)上進(jìn)一步發(fā)展為多平臺(tái)睡眠剝奪法,。
1.2多平臺(tái)睡眠剝奪法
M P法于1981年應(yīng)用在大鼠睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中,,在 M P中為擴(kuò)展大鼠的活動(dòng)空間將小平臺(tái)由 SP 中的 1 個(gè)增加至 7 個(gè),仍將1只大鼠放在小平臺(tái)間進(jìn)行睡眠剝奪試驗(yàn),,因大鼠可以在 7個(gè)小平臺(tái)間自由活動(dòng),,故活動(dòng)范圍較 SP 中有明顯增大。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較,,在M P中反映應(yīng)激增強(qiáng)的一些指標(biāo),,如腎上腺重量增加和胸腺重量減少仍然存在,甚至在大鼠血液中 ACTH %CORT 的增加及腎上腺重量的增加較SP的更高,提示 M P較SP有更強(qiáng)的應(yīng)激性!考慮到大鼠為群居動(dòng)物,,單只大鼠實(shí)驗(yàn)易導(dǎo)致與所在群體的隔離,。為克服群體隔離所帶來(lái)的應(yīng)激反應(yīng),有學(xué)者將 M P 法進(jìn)一步改良發(fā)展為改良多平臺(tái)睡眠剝奪法!
1.3改良多平臺(tái)睡眠剝奪法
在MMPM 中將 10 只大鼠(具體數(shù)目可根據(jù)實(shí)際需要確定)同時(shí)放在裝有 14 或 15 個(gè)小平臺(tái)的水槽中(長(zhǎng) 127 cm ,,寬 44 cm ,,高 45 cm )進(jìn)行實(shí)驗(yàn),這樣既避免了 SP及M P中單只大鼠與群體隔離的缺點(diǎn),,又保留了 M P 中活動(dòng)范圍增大的特點(diǎn),,因在實(shí)驗(yàn)時(shí)大鼠多是 3 只或 4 只一籠進(jìn)行飼養(yǎng),如 1 組實(shí)驗(yàn)需 10 只大鼠,,則需要3籠或 4籠大鼠,,考慮到來(lái)自不同籠的大鼠放在一起實(shí)驗(yàn)也可能造成群體的不穩(wěn)定,有學(xué)者將實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)一步改良,,將實(shí)驗(yàn)所需的 10 只大鼠放在同一只籠中飼養(yǎng) 2 周,,實(shí)驗(yàn)時(shí)再將這些大鼠放在一起同時(shí)進(jìn)行睡眠剝奪實(shí)驗(yàn),這樣以克服實(shí)驗(yàn)時(shí)大鼠群體不穩(wěn)定的缺點(diǎn),,從而將實(shí)驗(yàn)時(shí)的不確定因素減至低! 實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)在MMPM中"經(jīng)采取措施保持大鼠群體穩(wěn)定性及避免大鼠與群體分離后" 大鼠腎上腺重量%體重減輕量%血清中促腎上腺皮質(zhì)激素(A CTH )和腎上腺皮質(zhì)酮 (CO RT) 的含量均較M P中為低,,提示M M PM 較 M P 具有更低的應(yīng)激性,是較為理想的REM 剝奪方法,。
2強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)睡眠剝奪法
此類(lèi)睡眠剝奪方法形式多樣,,在腦電監(jiān)護(hù)情況下可行全部的睡眠剝奪和選擇性的睡眠剝奪。其共同特點(diǎn)是通過(guò)動(dòng)力裝置迫使大鼠不停地運(yùn)動(dòng),,從而達(dá)到睡眠剝奪的目的,。此類(lèi)方法的優(yōu)點(diǎn)是睡眠剝奪效果明顯,睡眠剝奪的時(shí)間及強(qiáng)度易于掌握,,重復(fù)性好,,無(wú)須實(shí)驗(yàn)人員隨時(shí)觀察實(shí)驗(yàn)情況,減輕了實(shí)驗(yàn)人員工作強(qiáng)度,。缺點(diǎn)是長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)引起機(jī)體的一系列應(yīng)激反應(yīng)可能干擾睡眠剝奪的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,現(xiàn)選取其中兩種有代表意義的方法介紹如下
2.1水平轉(zhuǎn)盤(pán)睡眠剝奪法
此方法應(yīng)用廣泛,于 1983 年應(yīng)用在睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中,,實(shí)驗(yàn)裝置由一個(gè)電腦控制臺(tái),、一個(gè)水平轉(zhuǎn)盤(pán)及兩個(gè)開(kāi)放的長(zhǎng)方形有機(jī)玻璃缸組成,轉(zhuǎn)盤(pán)直徑為 46 cm,,在電腦控制下可以按順時(shí)針逆時(shí)針?lè)较螂S機(jī)水平轉(zhuǎn)動(dòng)! 兩只有機(jī)玻璃缸的尺寸均為長(zhǎng)60 cm ,,寬20.5 cm,高 60 cm ,。在距離缸底 5 cm 處的缸側(cè)壁開(kāi)有一條縫隙,,使轉(zhuǎn)盤(pán)的一半能分別從縫隙伸入兩只玻璃缸中并能隨意轉(zhuǎn)動(dòng),。缸底留置水約 2 cm 深,轉(zhuǎn)盤(pán)離水面約3 cm 實(shí)驗(yàn)前1周將睡眠剝奪大鼠頭頸部植入微電極" 并將微電極與電腦控制臺(tái)相連,,將大鼠放在轉(zhuǎn)盤(pán)上適應(yīng)環(huán)境1周,,每天約1 h讓大鼠習(xí)慣在轉(zhuǎn)盤(pán)上活動(dòng),進(jìn)水,,進(jìn)食等,。實(shí)驗(yàn)時(shí)將實(shí)驗(yàn)組的大鼠及對(duì)照組的大鼠分別置于兩只缸中的轉(zhuǎn)盤(pán)上,當(dāng)電腦通過(guò)微電極監(jiān)測(cè)到實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)入慢波或快波睡眠的腦電信號(hào)后,,立即發(fā)出指令使轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)動(dòng) 6 s(6 s內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng) 1/3 圈),,當(dāng)大鼠被轉(zhuǎn)到玻璃缸壁時(shí),因被玻璃缸壁擋住而可能掉入水中,,每次在實(shí)驗(yàn)組睡眠剝奪大鼠進(jìn)入睡眠時(shí)轉(zhuǎn)盤(pán)即轉(zhuǎn)動(dòng) 6 s,,方向隨機(jī),轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)兩只大鼠均被動(dòng)地隨著轉(zhuǎn)盤(pán)移動(dòng),。此方法一次只剝奪一只大鼠睡眠,當(dāng)實(shí)驗(yàn)組的睡眠剝奪大鼠在活動(dòng),、進(jìn)水,、進(jìn)食時(shí)轉(zhuǎn)盤(pán)并不轉(zhuǎn)動(dòng)而此時(shí)對(duì)照組的大鼠則可趁機(jī)睡覺(jué)以彌補(bǔ)被剝奪的睡眠。此方法中睡眠剝奪組大鼠與對(duì)照組大鼠條件極其相似,,因而可減少因?qū)嶒?yàn)條件不同而所致的應(yīng)激反應(yīng),。
2.2旋轉(zhuǎn)圓筒睡眠剝奪法
此方法于 1979 年應(yīng)用于睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中,設(shè)備主要由一柱形圓筒及一小型慢速馬達(dá)構(gòu)成,。圓筒直徑 30 cm,,高 30 cm 。圓筒底由 PVC (聚氯乙烯)構(gòu)成,,側(cè)壁由直徑為 10.4 m m 的 PVC 桿圍成,。桿長(zhǎng)度 30 cm,桿之間間隔 15.5 m m,,圓筒與小型馬達(dá)相連,。馬達(dá)轉(zhuǎn)速為每 45 s轉(zhuǎn) 1 圈(也有學(xué)者應(yīng)用每 m in 轉(zhuǎn) 1 圈)。至少在實(shí)驗(yàn)前 2 d每天將大鼠放入圓筒中適應(yīng)環(huán)境 1 次,,適應(yīng)時(shí)間不少于 3 h,。實(shí)驗(yàn)時(shí)將馬達(dá)按 45 s每1 圈進(jìn)行勻速轉(zhuǎn)動(dòng),通過(guò)圓筒的轉(zhuǎn)動(dòng)帶動(dòng)大鼠不停運(yùn)動(dòng)而達(dá)到睡眠剝奪的目的,。此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行,,睡眠剝奪效果明顯。缺點(diǎn)是長(zhǎng)時(shí)間不停運(yùn)動(dòng)可引起機(jī)體的運(yùn)動(dòng)后應(yīng)激反應(yīng)及身體疲勞,,可能干擾睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)結(jié)果! 此類(lèi)方法發(fā)展出多種變化,,有實(shí)驗(yàn)者在進(jìn)行新生大鼠睡眠剝奪時(shí)將筒旋轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)至 2~3 r/m in后期逐漸增加至 6~7 r/m in,。
3輕柔刺激法
此方法在短期的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多,當(dāng)實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)觀察大鼠行為或通過(guò)腦電波監(jiān)護(hù)觀察到大鼠進(jìn)入睡眠時(shí),,通過(guò)輕輕拍打大鼠籠子或應(yīng)用聲音,、光線(xiàn)的刺激促使大鼠保持清醒,必要時(shí)還可用紙卷,、鉛筆或用手直接觸摸大鼠使大鼠無(wú)法進(jìn)入睡眠,。注意不能將大鼠移出籠外!此方法簡(jiǎn)單易行,在腦電監(jiān)護(hù)情況下可進(jìn)行 TSD 或 SSD 實(shí)驗(yàn),,在無(wú)腦電監(jiān)護(hù)時(shí)需要實(shí)驗(yàn)人員在旁不間斷觀察大鼠行為,,故較適合行短時(shí)間的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)。
4藥物睡眠剝奪法
定時(shí)給大鼠注射藥物,, 此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行,,操作方便,不需要特殊儀器,。缺點(diǎn)是大鼠存在個(gè)體差異,, 睡眠剝奪的效果及程度及不易掌握。多用在研究某些特殊藥物藥理作用的實(shí)驗(yàn)中,。
5. 剝奪桿睡眠剝奪法(型號(hào):XR-XS107)
在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室籠中采用間隙性的剝奪桿掃描進(jìn)行觸覺(jué)刺激來(lái)干擾自由行為的小鼠,。該方法防止了人類(lèi)接觸和干預(yù)對(duì)睡眠剝奪的影響,并且在整個(gè)睡眠剝奪過(guò)程期間小化身體活動(dòng),。此外,,該程序準(zhǔn)確且可預(yù)測(cè)。實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物從小都是在飼養(yǎng)籠中長(zhǎng)大,,基于實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)籠使得動(dòng)物能夠保持在正常的社會(huì)環(huán)境中實(shí)施了一種相對(duì)無(wú)壓力的方法來(lái)誘導(dǎo)動(dòng)物睡眠剝奪模型,,從而避免了外界環(huán)境及其他因素對(duì)睡眠剝奪的影響。此外,,基于飼養(yǎng)籠式的睡眠剝奪儀易于組裝和清洗,,設(shè)計(jì)更加地人性化。