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采用高架十字迷宮實驗,、曠場實驗觀察大鼠行為學變化
閱讀：2101 發(fā)布時間：2019-10-8基于“病證結(jié)合”理論探討廣泛性焦慮心陰
虧虛證大鼠模型的構(gòu)建與評價
摘要：目的：基于“病證結(jié)合”理論,，構(gòu)建和評價廣泛性焦慮（generalized anxiety disorder, GAD)心陰虧虛證 大鼠模型,。方法:按隨機數(shù)字表法將32只SD大鼠隨機分為4組,，每組8只,，即空白組、模型組,、天王補心丸組,、di西泮片組。根據(jù)先疾病后證型的思路進行造模,，除空白組外,，其余3組大鼠通過不確定性空瓶應激法先建立 GAD模型，再采用水環(huán)境小站臺睡眠剝奪法形成大鼠心陰虧虛證候模型,，以此構(gòu)建GAD心陰虧虛證模型,。造模 成功后，空白組和模型組不給與任何處理,，天王補心丸組,、di西泮片組分別給予天王補心丸、di西泮片灌胃,，1次/ d,連續(xù)干預21 d,。從宏觀表征、微觀指標,、以方驗證三個方面對模型進行評價,。每日觀察大鼠一般情況。造模 前,、造模后及干預第1,、2、3周末采用高架十字迷宮實驗,、曠場實驗觀察大鼠行為學變化,。造模前、造模后及干預 第3周末檢測大鼠收縮壓,、心率,、呼吸、肛溫水平,。干預第3周末采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應法（real - time PCR)檢測大鼠海馬GR mRNA表達水平,。結(jié)果：（1)宏觀表征：①行為學結(jié)果顯示：與空白組比較，造模后,、 造模后1周,、造模后2周、造模后3周模型組OE%值,、OT%值,、水平運動、垂直運動均降低（P <0. 05),。②生命體 征結(jié)果顯示：與空白組比較,，造模后、造模后3周模型組收縮壓均較低（P<0. 01);心率,、呼吸,、肛溫均較高（P< 0.01)。（2)微觀指標:RT-PCR結(jié)果顯示：造模后3周,，與空白組比較,，模型組大鼠海馬GR mRNA表達水平降 低（P <0. 01)。（3)以方驗證：①行為學結(jié)果：與模型組比較,，天王補心丸組,、di西泮片組干預后各時間點OE%值、OT%值,、水平運動,、垂直運動均升高（P<0. 05);di西泮片組干預后各時間點OE%值、干預第1,、周末OT%值,、水平運動和干預第1、周末垂直運動均升高（P <0. 01),。②生命體征結(jié)果：干預第3周末,，與模型組比較，天 王補心丸組,、di西泮片組收縮壓均升高（P <0. 05),心率,、呼吸、肛溫均降低（P <0. 05),。③RT - PCR結(jié)果：干預 第3周末,，與模型組比較，天王補心丸組,、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達水平均升高（P <0. 05),。結(jié)論：采 用不確定性空瓶應激法結(jié)合水環(huán)境小站臺睡眠剝奪法成功構(gòu)建了 GAD心陰虧虛病證結(jié)合模型，該模型較為穩(wěn) 定,，可控性相對較強,，值得進一步應用。
關鍵詞：廣泛性焦慮;心陰虧虛;病證結(jié)合;模型
廣泛性焦慮癥（GAD)是常見的焦慮癥類型,，以泛化 或持續(xù)存在的焦慮為主要臨床表現(xiàn),，常伴有自主神經(jīng)功能 紊亂及運動不安的癥狀1,。中醫(yī)學認為心脾兩虛、肝郁化 火和心腎不交是GAD的主要證型2,。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏 的加快,，工作生活壓力的加大，GAD證型逐步由肝郁化火 向心陰虧虛轉(zhuǎn)變3,。近年來,，眾多學者4-6聚焦于中醫(yī)藥 治療GAD的多靶點整體作用優(yōu)勢，相繼報道了中藥,、針灸,、 推拿等對GAD的治療效果。但是,，關于中醫(yī)藥治療GAD 的具體作用機制仍不清楚7,。中醫(yī)診療講究對疾病進行 辨證論治，但目前關于GAD的病證結(jié)合動物模型還不夠成 熟,，由于缺乏機制研究的載體,，所以影響了 GAD的中醫(yī)應 用基礎研究進一步開展8。因此,，建立穩(wěn)定的,、可重復的、 符合中醫(yī)病因bin機的GAD病證結(jié)合動物模型十分必要,。 病證結(jié)合既是一種理論,，也是一種方法，體現(xiàn)了現(xiàn)代中醫(yī) “據(jù)病言證,，究證言法,，法隨證立，方證相應”的診療思 路9,。病證結(jié)合動物模型[10 ,是基于中醫(yī)藥理論指導,，結(jié) 合現(xiàn)代醫(yī)學理論與實驗動物科學知識，采用中醫(yī)學病因復 制證候動物模型,，通過現(xiàn)代醫(yī)學病因復制疾病動物模型,，令 模型同時具有疾病與證候特征的一類造模方法。本研究根 據(jù)病證結(jié)合理論,，采用不確定性空瓶應激法[11]建立GAD 疾病模型,，結(jié)合水環(huán)境小站臺睡眠剝奪法[12造成心陰虧虛 證候模型，終構(gòu)建了 GAD心陰虧虛病證結(jié)合模型,，并從 宏觀表征,、微觀指標、以方驗證（天王補心丸）三個角度評 價了該模型
結(jié)果顯示：①行為學：與模型組比較，天王補心丸組,、di西泮片組干預后各時間點OE%值,、OT%值、水平運動,、垂 直運動均升高（P< 〇.〇5);di西泮片組干預后各時間點 OE%值,、干預第1、周末OT%值,、各時間點水平運動和干 預第1、周末垂直運動均升高（P<0. 01),。②生命體征： 干預第3周末,，與模型組比較，天王補心丸組,、di西泮片組 收縮壓均升高（P < 0. 05),心率,、呼吸、肛溫均降低（P < 0. 05),。③RT - PCR:干預第3周末,，與模型組比較，天王補 心丸組,、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達水平均升高 (P <0.05),。結(jié)果說明天王補心丸明顯改善了模型中GAD 心陰虧虛大鼠的焦慮癥狀及心陰虧虛狀況。中醫(yī)學有‘‘方 證相應”之說,，方證相應強調(diào)了方劑與其作用對象之間的 相互作用,，即方劑的功用是特定方藥與其作用對象特定證 之間相互作用的結(jié)果26 ,故通過‘‘以方驗證”的方式可以 反證證候模型是否構(gòu)建成功。天王補心丸為中醫(yī)經(jīng)典名 方,，具有滋陰養(yǎng)血,、補心安神等功效，主要用于心陰不足,，心 悸健忘,，失眠多夢等癥,是治療GAD心陰虧虛證的代表性 方藥27-28。已有臨床研究29證實,，采用天王補心湯治療 心陰不足型GAD可以達到和西藥同樣的抗焦慮效果,。本 研究結(jié)果表明天王補心丸對GAD心陰虧虛大鼠的焦慮行 為及心陰虧虛表現(xiàn)均有明顯改善作用。故從‘‘方證相關,， 以方驗證”的評價角度證實了本實驗模型的穩(wěn)定性和可靠 性,。同時，本研究結(jié)果也說明了天王補心丸在干預治療 GAD心陰虧虛大鼠時,，主要通過增加大鼠海馬組織內(nèi)GR mRNA表達量以發(fā)揮抗焦慮作用,。由此可知，病證方藥緊 密聯(lián)系，病證結(jié)合,、方證相應,，天王補心丸切實地對GAD心 陰虧虛大鼠病證結(jié)合模型進行了驗證和評價。
5結(jié)論
本研究采用不確定性空瓶應激法結(jié)合水環(huán)境小站臺睡 眠剝奪法構(gòu)建了 GAD心陰虧虛病證結(jié)合模型,，并且從宏觀 表征,、微觀指標、以方驗證（天王補心丸)3個角度對模型進 行了評價,。結(jié)果表明,，模型穩(wěn)定、相對可控,、造模理念符合 中醫(yī)病因bin機,，值得推廣應用。受實驗條件限制,，本模型的 微觀指標相對較少,，有待進一步研究。