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CRISPR/Cas9基因敲除細胞系/細胞株

賽爾瑞成采用CRISPR/Cas9系統(tǒng),，提供基因敲除細胞系構(gòu)建服務(wù),。賽爾瑞成根據(jù)目的基因序列設(shè)計合成sgRNA，將Cas9和sgRNA基因轉(zhuǎn)染目的細胞,，進而敲除目的基因,，并進行單克隆篩選，獲得基因敲除單克隆細胞系,。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)作為新一代基因編輯工具,，因其構(gòu)建方便,、設(shè)計靈活，操作簡單,、效率高成本低,，成為基因敲除的新一代利器。該系統(tǒng)由有DNA切割活性Cas9蛋白和識別特異靶點的sgRNA組成,。Cas9是一種核酸內(nèi)切酶,，它和sgRNA構(gòu)成的復合體能與DNA分子上的特定序列結(jié)合，并在PAM序列(幾乎存在于所有基因)上游切斷DNA雙鏈,。DNA被切斷后,，細胞會啟動DNA損傷修復機制，造成基因的缺失,、移碼,、插入等隨機突變模式，達到修復雙鏈斷裂的目的,，同時造成靶向基因敲除,。

CRISPR/Cas9基因敲除細胞系/細胞株構(gòu)建服務(wù)流程

案例展示：
1．構(gòu)建慢病毒載體的crispr sgRNA的單質(zhì)粒系統(tǒng)。
2．經(jīng)過293T細胞轉(zhuǎn)染,，包裝得到慢病毒,。
3．通過慢病毒轉(zhuǎn)導的方式感染目的細胞。
4．通過抗生素篩選和單克隆挑取后,，擴大培養(yǎng),。
5．經(jīng)挑取單克隆細胞后，提取得到單克隆細胞的基因組DNA,，再通過PCR擴增目的基因編輯位點的上下游區(qū)段,，經(jīng)過TA克隆連接到PMD19T的載體上，進行測序驗證,，選取10個菌落測序鑒定得到單克隆的細胞是否單一,。
下圖是交付給客戶的單克隆細胞驗證結(jié)果。

T7E1酶切法突變體檢測試驗檢測CRISPR/Cas9的編輯效率：
賽爾瑞成采用T7E1酶切法突變體檢測試驗檢測CRISPR/Cas9的編輯效率,。若sgRNA有效編輯了基因組DNA,，則目的基因在修復后會出現(xiàn)堿基缺失突變現(xiàn)象，通過分析T7E1酶處理目標DNA**片段的雜合鏈后的情況,，從而驗證Cas/sgRNA的編輯效率,，用于篩選編輯效率高的sgRNA,。

公司簡介：

賽爾瑞成（北京）生命科學技術(shù)有限公司建有專業(yè)的分子生物學平臺、原核發(fā)酵平臺,、哺乳動物細胞培養(yǎng)平臺,、蛋白純化和制劑平臺。賽爾瑞成能進行重組蛋白,、多克隆抗體,、單克隆抗體、基因工程抗體（包括納米抗體,、單鏈抗體,、雙特異抗體等）、細胞治療產(chǎn)品的研發(fā)工作,。賽爾瑞成匯聚了一批分子生物學,、免疫學、細胞生物學,、生物工程等方面的專家，技術(shù)團隊成員均來自國內(nèi)外科研院所和生物技術(shù)企業(yè),，擁有雄厚的研發(fā)實力和產(chǎn)品開發(fā)經(jīng)驗,。
 

實驗室建設(shè)：

本產(chǎn)品僅作為科研試劑使用！