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細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建于二十世紀(jì)初,，歷經(jīng)一個多世紀(jì)的發(fā)展,，現(xiàn)在已成為生命科學(xué)領(lǐng)域越來越重要的實驗技術(shù)之一,。由于細(xì)胞的特殊性,，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，或在細(xì)胞建株和建系過程中，隨著傳代次數(shù)的增加,，細(xì)胞的各種生物特性都會逐漸發(fā)生變化,。因此,，原始細(xì)胞種子的及時保存就顯得尤為必要。在雜交瘤單抗的制備過程中,，雜交瘤細(xì)胞以及克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存,，是*的操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時候,，在細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細(xì)胞的污染,、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等緣故而導(dǎo)致實驗失敗，如果沒有原始細(xì)胞的凍存,，則將因為上述的意外而前功盡棄,。除此之外，購買,、交換和運送某些細(xì)胞也需要利用細(xì)胞凍存的形式來進行,。因此，及時方便地進行細(xì)胞的凍存在實際工作中顯得十分必要,。

細(xì)胞凍存要取得好的效果,，多采用血清、甘油或二甲基亞砜（DMSO）等作為保護劑,，大限度的保存細(xì)胞活力。這些物質(zhì)有些能提高細(xì)胞膜對水的通透性,，在緩慢冷凍過程中可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。同時,，有些保護劑在細(xì)胞外也能減輕溶液中高濃度溶質(zhì)對細(xì)胞的損傷，進一步避免細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過程中受到損傷,。滲透性保護劑DMSO和非滲透性保護劑血清（主要含白蛋白）是使用較為廣泛,，效果較為穩(wěn)定可靠的。

此外,，采用“慢凍快融”的方法能較好地保證細(xì)胞存活,。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/分鐘，當(dāng)溫度低于-25℃時可加速,，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。復(fù)蘇細(xì)胞采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷,。

現(xiàn)有凍存方法存在的問題：
1、DMSO對細(xì)胞存在一定的毒性,，用量受到限制,，降低或者不使用DMSO,，尋找其它替代物是比較好的選擇。但是目前,，該技術(shù)領(lǐng)域還未發(fā)現(xiàn)凍存保護效果能與DMSO媲美的物質(zhì),，因此，聯(lián)合其它成分,，形成新的配方,，降低DMSO的含量就成了較為現(xiàn)實的選擇。
2,、血清,，即使是純化得到的白蛋白，由于其動物來源的特性,，會極大增加帶來病毒等感染物質(zhì)的可能,。而且，血清來源受限,，價格昂貴,，所以其使用也必然會受到越來越多的限制。因此,，尋找替代血清的非滲透性保護劑也顯得尤為必要,。
3、目前,，較成熟和穩(wěn)定的凍存細(xì)胞技術(shù)是將加有保護劑的細(xì)胞懸液置于-196℃液氮中,，這樣可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而保持細(xì)胞的特性，在需要的時候經(jīng)過復(fù)蘇程序,，使得細(xì)胞重新生長增殖以用于實驗,。細(xì)胞儲存在-196℃液氮中，理論上儲存時間是無限的,，但是液氮凍存步驟繁瑣,，需要經(jīng)過程序降溫，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,，然后移至-20℃冰箱30分鐘,，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），后才移至液氮罐中進行長期的儲存,。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量的死亡,。）

賽爾瑞成科學(xué)家團隊在細(xì)胞凍存領(lǐng)域進行了大量研究工作,，早在 2015年即自主研發(fā)了“無血清細(xì)胞凍存液”（貨號：CF0101） 。產(chǎn)品獲得了廣大科研工作者的喜愛,。

賽爾瑞成新發(fā)明了一種新的凍存液體系： 無血清低DMSO細(xì)胞凍存液（貨號：CF0201,；專利申請?zhí)枺?02010307890.6） ,，不僅可以省卻對血清的使用，而且還顯著降低了DMSO的用量,。同時,，本專利細(xì)胞凍存液凍存的細(xì)胞懸液可以直接放置于-80℃冰箱，既不需要繁瑣的程序降溫或采用程序降溫儀,，更不需要放置在-196℃液氮中,，節(jié)省了大量時間和精力。該細(xì)胞凍存液通用于人和各種動物細(xì)胞株,。特別配方（主要成分為5% DMSO和氨基酸）具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,。不含血清及動物來源性蛋白，能減少各類病毒,、霉菌和支原體等的污染,，確保凍存細(xì)胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,，也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存,。

產(chǎn)品特點：
1. 高安全性，不含血清及動物源成分,，病毒,、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性,。
2. 低DMSO,，DMSO的含量為5%（v/v），極大降低了對細(xì)胞潛在的毒性作用,。
3. 細(xì)胞存活率高,，無批次差異,。
4. *凍存液配方,，可直接使用，方便簡捷,。
5. 可直接存放于-80℃冰箱凍存,，無需經(jīng)過費時的程序降溫過程（省時、省力,、省錢）,，不需要采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮,。
6. 可原位凍存,，比如雜交瘤細(xì)胞的亞克隆，可以大規(guī)模減少工作量,，避免污染,。

凍存效果對比：

圖1. 小鼠成纖維細(xì)胞3T3細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)對比圖

對照B：存活率89%                                      本產(chǎn)品：存活率97%

圖2. 人胚腎細(xì)胞293E細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)對比圖

對照B：存活率86%                                   本產(chǎn)品：存活率93%

                 注：對照A: DMEM培養(yǎng)基+10%血清+10%DMSO,，液氮凍存；
                        對照B: Cellregen無血清細(xì)胞凍存液（DMSO 10% v/v）,；
                        本  品：無血清低DMSO細(xì)胞凍存液（DMSO 5% v/v）,。

附： 通用細(xì)胞凍存液，Cellregen無血清細(xì)胞凍存液,、無血清低DMSO細(xì)胞凍存液的比較