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賽爾瑞成（北京）生命科學(xué)技術(shù)有限公司
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細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建于二十世紀(jì)初,，歷經(jīng)一個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展，現(xiàn)在已成為生命科學(xué)領(lǐng)域越來越重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一,。由于細(xì)胞的特殊性,，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，或在細(xì)胞建株和建系過程中,，隨著傳代次數(shù)的增加,，細(xì)胞的各種生物特性都會逐漸發(fā)生變化。因此,，原始細(xì)胞種子的及時(shí)保存就顯得尤為必要,。在雜交瘤單抗的制備過程中，雜交瘤細(xì)胞以及克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存,，是*的操作,。因?yàn)樵跊]有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候，在細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染,、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等緣故而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,，如果沒有原始細(xì)胞的凍存，則將因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄,。除此之外,，購買、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞也需要利用細(xì)胞凍存的形式來進(jìn)行,。因此,，及時(shí)方便地進(jìn)行細(xì)胞的凍存在實(shí)際工作中顯得十分必要。
細(xì)胞凍存要取得好的效果,，多采用血清、甘油或二甲基亞砜（DMSO）等作為保護(hù)劑,，大限度的保存細(xì)胞活力,。這些物質(zhì)有些能提高細(xì)胞膜對水的通透性，在緩慢冷凍過程中可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。同時(shí),，有些保護(hù)劑在細(xì)胞外也能減輕溶液中高濃度溶質(zhì)對細(xì)胞的損傷,，進(jìn)一步避免細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過程中受到損傷,。滲透性保護(hù)劑DMSO和非滲透性保護(hù)劑血清（主要含白蛋白）是使用較為廣泛，效果較為穩(wěn)定可靠的,。
此外,，采用“慢凍快融”的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/分鐘,，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速,，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。復(fù)蘇細(xì)胞采用快速融化的方法,，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。
現(xiàn)有凍存方法存在的問題：
1,、DMSO對細(xì)胞存在一定的毒性,，用量受到限制，降低或者不使用DMSO,，尋找其它替代物是比較好的選擇,。但是目前，該技術(shù)領(lǐng)域還未發(fā)現(xiàn)凍存保護(hù)效果能與DMSO媲美的物質(zhì),，因此,，聯(lián)合其它成分，形成新的配方,，降低DMSO的含量就成了較為現(xiàn)實(shí)的選擇,。
2、血清,，即使是純化得到的白蛋白,，由于其動物來源的特性，會極大增加帶來病毒等感染物質(zhì)的可能,。而且,，血清來源受限，價(jià)格昂貴,，所以其使用也必然會受到越來越多的限制,。因此，尋找替代血清的非滲透性保護(hù)劑也顯得尤為必要,。
3,、目前，較成熟和穩(wěn)定的凍存細(xì)胞技術(shù)是將加有保護(hù)劑的細(xì)胞懸液置于-196℃液氮中,，這樣可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而保持細(xì)胞的特性,，在需要的時(shí)候經(jīng)過復(fù)蘇程序，使得細(xì)胞重新生長增殖以用于實(shí)驗(yàn),。細(xì)胞儲存在-196℃液氮中,，理論上儲存時(shí)間是無限的,，但是液氮凍存步驟繁瑣，需要經(jīng)過程序降溫,，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)（或隔夜）,，后才移至液氮罐中進(jìn)行長期的儲存,。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個(gè)小時(shí)，以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量的死亡,。）
賽爾瑞成科學(xué)家團(tuán)隊(duì)在細(xì)胞凍存領(lǐng)域進(jìn)行了大量研究工作，早在 2015年即自主研發(fā)了“無血清細(xì)胞凍存液”（貨號：CF0101） ,。產(chǎn)品獲得了廣大科研工作者的喜愛,。
賽爾瑞成新發(fā)明了一種新的凍存液體系： 無血清低DMSO細(xì)胞凍存液（貨號：CF0201；專利申請?zhí)枺?02010307890.6） ,，不僅可以省卻對血清的使用,，而且還顯著降低了DMSO的用量。同時(shí),，本專利細(xì)胞凍存液凍存的細(xì)胞懸液可以直接放置于-80℃冰箱,，既不需要繁瑣的程序降溫或采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮中,，節(jié)省了大量時(shí)間和精力,。該細(xì)胞凍存液通用于人和各種動物細(xì)胞株。特別配方（主要成分為5% DMSO和氨基酸）具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,。不含血清及動物來源性蛋白,，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,，確保凍存細(xì)胞安全,。既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存，也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存,。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 高安全性,，不含血清及動物源成分，病毒,、霉菌和支原體等污染可能性低,，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。
2. 低DMSO,，DMSO的含量為5%（v/v），極大降低了對細(xì)胞潛在的毒性作用,。
3. 細(xì)胞存活率高,，無批次差異,。
4. *凍存液配方，可直接使用,，方便簡捷,。
5. 可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經(jīng)過費(fèi)時(shí)的程序降溫過程（省時(shí),、省力,、省錢），不需要采用程序降溫儀,，更不需要放置在-196℃液氮,。
6. 可原位凍存，比如雜交瘤細(xì)胞的亞克隆,，可以大規(guī)模減少工作量,，避免污染。
凍存效果對比：
圖1. 小鼠成纖維細(xì)胞3T3細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)對比圖
對照B：存活率89% 本產(chǎn)品：存活率97%
圖2. 人胚腎細(xì)胞293E細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)對比圖
對照B：存活率86% 本產(chǎn)品：存活率93%
注：對照A: DMEM培養(yǎng)基+10%血清+10%DMSO,，液氮凍存,；
對照B: Cellregen無血清細(xì)胞凍存液（DMSO 10% v/v）；
本 品：無血清低DMSO細(xì)胞凍存液（DMSO 5% v/v）,。
附： 通用細(xì)胞凍存液,，Cellregen無血清細(xì)胞凍存液、無血清低DMSO細(xì)胞凍存液的比較
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| 通用細(xì)胞凍存液 | Cellregen 無血清細(xì)胞凍存液 | 無血清低 DMSO 細(xì)胞凍存液 |
| 主要成份 | 含血清,、含 DMSO | 不含血清,，含 DMSO 10% | 不含血清，低 DMSO 5% |
| 細(xì)胞毒性 | 高 | 高 | 低 |
| 安全性 | 低 動物來源病毒,、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)偏高 | 高 無動物來源病毒,、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn) | 高 無動物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn) |
| 凍存細(xì)胞種類 | 適合含血清細(xì)胞凍存 | 通用型 適合各類細(xì)胞凍存 | 通用型 適合各類細(xì)胞凍存 |
| 無血清培養(yǎng)細(xì)胞生長狀態(tài) | 易改變易由懸浮狀態(tài)回復(fù)貼壁狀態(tài) | 保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) | 保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) |
| 批次差異 | 批次差異大 | 無批次差異 | 無批次差異 |
| 操作方法 | 步驟繁瑣 需程序降溫凍存 | 簡單快捷 一步凍存 -80 ℃冰箱 | 簡單快捷 一步凍存 -80 ℃冰箱 |
| 保存設(shè)備 | 要求高（液氮） | 要求低（ -80℃ 冰箱） | 要求低（ -80℃ 冰箱） |
| 微量凍存 | 細(xì)胞易死亡,，存活率偏低 | 細(xì)胞存活率高 | 細(xì)胞存活率高 |
| 原位凍存 | 不可行 | 可行,，且方便快捷 如 : 雜交瘤細(xì)胞孔板凍存 | 可行，且方便快捷 如 : 雜交瘤細(xì)胞孔板凍存 |
